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原文传递一种检测紫杉醇类药物的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

专利名称：	一种检测紫杉醇类药物的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用
摘要：	本发明提供了一种检测紫杉醇类药物的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用，属于体外诊断试剂技术领域。本发明所述试纸条包括试纸和样品稀释液，所述试纸包括底板及在底板上依次搭接的样品吸收垫、荧光微球垫、结合垫和吸水垫；所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的抗紫杉醇单克隆抗体，所述结合垫上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有紫杉醇类药物半抗原‑载体蛋白偶联物，所述质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体；所述紫杉醇类药物单克隆抗体是以紫杉醇类药物半抗原‑载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述紫杉醇类药物半抗原‑载体蛋白偶联物的分子结构式为式I。本发明提供的试纸条检测灵敏度高，特异性强，制作成本低，使用简单。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京丹大生物技术有限公司
发明人：	许秀丽;王艳新;常缘荣;周建平
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201811600900.4
公开号：	CN109813691A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	刘奇
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	100000 北京市通州区中关村科技园区通州园光机电一体化产业基地嘉创路5号1号楼301-303室
主权项：	1.一种检测紫杉醇类药物的时间分辨荧光免疫层析试纸条，包括试纸和样品稀释液，所述试纸包括底板及在底板上依次搭接的样品吸收垫、荧光微球垫、结合垫和吸水垫，其特征在于：所述荧光微球垫喷涂有荧光微球标记的抗紫杉醇单克隆抗体，所述结合垫上固定有检测区和质控区，所述检测区喷涂有紫杉醇类药物半抗原-载体蛋白偶联物，所述质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体；所述抗紫杉醇单克隆抗体是以紫杉醇类药物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述紫杉醇类药物半抗原-载体蛋白偶联物是由7-木糖基紫杉醇半抗原与载体蛋白偶联得到，其分子结构式如式I所示： 2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球是用聚苯乙烯包裹稀土离子Eu+的微球，所述微球表面含有羧基基团。 3.根据权利要求2所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球的直径为100～300nm。 4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述样本稀释液为0.008～0.012mol/L的PB缓冲液，所述PB缓冲液的pH值为7.2～7.6，所述PB缓冲液中含有0.15～0.25％(W/V)的Triton x-100。 5.权利要求1～4任意一项所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，包括样品吸收垫的制备方法，荧光微球垫的制备方法，结合垫的制备方法，样品吸收垫、荧光微球垫、结合垫、吸水垫的组装和剪切。 6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述样品吸收垫的制备方法包括如下步骤：用0.08～0.12mol/L，pH值7.0～7.4的磷酸盐缓冲液浸泡玻璃纤维膜1.5～3h；37℃干燥1.5～3h；所述磷酸盐缓冲液中含有0.4～0.6％体积份的牛血清白蛋白。 7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述荧光微球垫的制备方法包括如下步骤： (1)用荧光微球标记抗紫杉醇单克隆抗体，得到标记抗体； (2)用贮存缓冲液稀释所述标记抗体，得到5～20μg/ml标记抗体稀释液； (3)将所述标记抗体稀释液喷涂到玻璃纤维膜上，喷涂量为1～6μl/cm，37℃干燥12～18h，得到荧光微球垫。 8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述贮存缓冲液为0.008～0.012mol/L的PB缓冲液，所述PB缓冲液的pH值为7.2～7.6，所述PB缓冲液中含有0.008～0.012％(W/V)的NaN3和0.08～0.12％的牛血清白蛋白。 9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述结合垫的制备方法包括如下步骤： I，在硝酸纤维素膜上划定检测区和质检区； II，用0.04～0.06mol/L，pH值7.0～7.4的PB缓冲液稀释紫杉醇类药物半抗原-载体蛋白偶联物，得到160～240μg/ml的偶联物稀释液；再将所述偶联物稀释液喷涂到硝酸纤维素膜的检测区，喷涂量为1～1.5μL/cm； III，用0.04～0.06mol/L，pH值7.0～7.4的PB缓冲液稀释羊抗鼠抗抗体，得到160～240μg/ml的羊抗鼠抗抗体稀释液；再将所述羊抗鼠抗抗体稀释液喷涂到硝酸纤维素膜的质控区，喷涂量为1～1.5μL/cm； IV，将喷涂完成的硝酸纤维素膜置于37℃条件下干燥4～6h，得到结合垫；所述步骤II和步骤III无时间顺序限定。 10.权利要求1～4任意一项所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，或者权利要求5～9任意一项所述的制备方法制备得到的时间分辨荧光免疫层析试纸条在检测紫杉醇类药物中的应用，其特征在于，包括如下步骤： ①用所述样品稀释液对样品进行前处理，得到待测样品； ②用所述时间分辨荧光免疫层析试纸条对所述待测样品进行检测，得到检测后的试纸条； ③用荧光检测分析仪分析检测后的试纸条，得到检测结果。
所属类别：	发明专利