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原文传递一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法

专利名称：	一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法
摘要：	本发明公开了一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法。本发明中适配体用于结合目标菌并且作为模板，介导纳米银粒子的原位合成。包覆聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米颗粒通过静电吸引用于细菌的有效捕获和富集，特定的SERS谱随着Fe3O4@PEI‑细菌‑银纳米粒子复合物的形成而增强，从而达到特定的目标细菌无标记检测。本发明聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米粒可以快速从溶液中捕获和分离细菌，捕获效率高。检测灵敏度可达102cfu/mL，检测时间小于30分钟。该方法特异性强、稳定性好、操作简便、成本低，可用于不同的病原菌鉴别，对血液样品同样有效。该方法是用于临床和食品安全中的病原菌检测一种很有前途的工具。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	徐州医科大学附属医院
发明人：	顾兵;汪崇文;徐玲;马萍;王蕾
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910282679.0
公开号：	CN109813701A
代理机构：	北京文苑专利代理有限公司
代理人：	何新平
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	221000 江苏省徐州市淮海西路99号
主权项：	1.一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法,其特征在于，按照如下步骤进行： 1)将细菌特异性核酸适配体添加到测试细菌的样品中孵育,使核酸适配体分子特异性地与目标细菌表面结合； 2)将聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米粒添加到细菌样品中，利用带正电荷的聚乙烯亚胺壳层和带负电荷细菌-适配体复合物的相互吸引作用，捕获细菌-适配体复合物； 3)用外部磁铁分离出聚乙烯亚胺的Fe3O4-细菌-适配体纳米粒子复合物，使其吸附银离子并加入NaBH4，将银离子还原成银纳米粒子并沉积在细菌的表面，从而形成聚乙烯亚胺的Fe3O4-细菌-适配体-银纳米粒子复合物； 4)将聚乙烯亚胺的Fe3O4-细菌-适配体-银纳米粒子复合物干燥后进行SERS检测，获得与适配体结合的细菌的SERS光谱，从而达到特定的目标细菌无标记检测。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按照如下步骤进行： 1)制备聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米粒：通过改进的溶胶-热反应合成超顺磁性Fe3O4纳米粒，将制备好的超顺磁性Fe3O4纳米粒与聚乙烯亚胺溶液等体积混合，超声30min，聚乙烯亚胺逐渐自组装在磁性Fe3O4纳米粒表面，去离子水冲洗三次，在4℃保存备用； 2)将1毫升的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌菌液中加入适配子共同孵育20分钟； 3)加3μL聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米粒到步骤2)混合液中孵育,在室温下以800rpm速度摇动10分钟，随后，磁性收集Fe3O4@PEI-细菌-适配体复合物，PBS缓冲液(10mM,pH 7.4)洗涤2次； 4)聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米粒-细菌-适配体复合物被转移到埃普多夫管,加入100μL 10mM硝酸银溶液,漩涡1分钟，然后在埃普多夫管中加入100μL NaBH4再漩涡1分钟； 5)聚乙烯亚胺的Fe3O4磁性纳米粒-细菌-适配体@Ag被磁富集并滴在硅基片上进行SERS光谱的测量。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中细菌特异性核酸适配体的浓度为300nM。 4.根据权利要求2-3所述的方法，其特征在于，所述步骤5)采用正交偏最小二乘判别分析化学计量学方法准确观察不同细菌的指纹SERS图谱的差异。
所属类别：	发明专利