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原文传递一种检测乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法

专利名称：	一种检测乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法
摘要：	本发明乙虫腈的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含乙虫腈单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有乙虫腈蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测乙虫腈，方便、快捷、结果准确。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京亿特生物科技有限公司
发明人：	杜霞;洪霞;张淑雅
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201711162989.6
公开号：	CN109813901A
分类号：	G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	211100 江苏省南京市江宁区江宁科学园芝兰路18号
主权项：	1.乙虫腈胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到： (1)胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用； (2)抗体的预处理：将要标记的乙虫腈抗体在1000 r/min，4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过0.22 µm滤膜； (3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40 mL，用0.25 mol/L K2CO3调节胶体金溶液pH至 8.5，电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 抗体蛋白的蛋白溶液，反应10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温1500 r/min离心10 min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000 r/min离心20 min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL，制备成乙虫腈单克隆抗体胶体金标记物； (4)胶体金膜的制备：将步骤(3)乙虫腈蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5 µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含乙虫腈蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜； (5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、乙虫腈蛋白质偶联物稀释成1 mg/mL，用划膜仪依次以1 µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2 h后，室温自然晾干或者37℃烘干； (6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干； (7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。 2.根据权利要求1所述的乙虫腈胶体金检测卡，其特征在于所述步骤(5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方；所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1 g小牛血清蛋白(BSA)和0.8 g氯化钠(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01 mol/L PBS定容至100 mL。
所属类别：	发明专利