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利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法
| 专利名称： | 利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法，属于潜在激动剂的筛选领域。OX40/OX40L的HTRF结合分析实验筛选潜在激动剂的方法，包括如下步骤：1)配制已构建好的带有不同标签的OX40或OX40L蛋白，待筛选样品用；2)在微孔板中依次加入待筛选样品、OX40及OX40L蛋白，上述两种对应的带标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor；3)室温孵育一段时间，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值即为原始数据。本发明提供了新的方法，实现了生化水平上筛选OX40/OX40L潜在激动剂，无需构建细胞，更加直接快捷。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 浠思(上海)生物技术有限公司 |
| 发明人： | 张冰洁 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-02-15T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-06-04T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910116616.8 |
| 公开号： | CN109839509A |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 200131 上海市浦东新区中国(上海)自由贸易试验区张衡路1299号2幢401室 |
| 主权项： | 1.一种利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法，其特征在于该方法包括如下步骤： S110,配制已构建好的带有不同标签的OX40或OX40L蛋白，待筛选样品用； S120,在微孔板中依次加入待筛选样品、OX40及OX40L蛋白，上述两种对应的带标签抗体，分别偶联Donor和Acceptor； S130,室温孵育一段时间，用酶标仪读数检测荧光，665nm/620nm的比值即为原始数据；检测的为HTRF两个荧光665nm和620nm，即时间分辨荧光，当665nm/620nm的比值越低，样品的效应越高； 其中上述偶联Donor和Acceptor的两种标签抗体分别检测相互作用的蛋白OX40和OX40L，从而形成四个物质聚合的复合物，拉近Donor和Acceptor的距离，能量能够从Donor上转移到Acceptor上，使Acceptor产生荧光；若样品能与OX40蛋白，则随着样品浓度的增加，665nm/620nm的比值降低；待稳定后测定荧光值的变化便可量化样品的效价，上述OX40和OX40L为重组蛋白。 2.根据权利要求1所述的利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法，其特征在于：上述微孔板包括96孔板，384孔板和1536孔板。 3.根据权利要求1所述的利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法，其特征在于：该筛选方法的反应体系为8-20ul。 4.根据权利要求1所述的利用OX40/OX40L的HTRF结合分析实验技术筛选潜在激动剂的方法，其特征在于：可用于筛选的潜在激动剂包括小分子化合物和各种来源的抗体。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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