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原文传递用于增强荧光的组合物和方法

专利名称：	用于增强荧光的组合物和方法
摘要：	本公开涉及荧光染料领域，并且特别涉及用于增加荧光信号和减少荧光猝灭的组合物和方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	美国;US
申请人：	生命科技股份有限公司
发明人：	S·德塞;M·恩兰德;K·吉;M·贝克;R·阿吉勒;S·斯维尼;A·卢卡维什尼科夫;S-J·黄
专利状态：	有效
申请日期：	2017-09-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-04T00:00:00+0800
申请号：	CN201780062491.4
公开号：	CN109844538A
代理机构：	上海专利商标事务所有限公司
代理人：	陶家蓉
分类号：	G01N33/58(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	美国加利福尼亚州
主权项：	1.一种包含第一抗体的组合物，其中两个或更多个荧光标记物和两个或更多个间隔分子共价连接到所述第一抗体，和其中所述荧光标记物和间隔分子彼此不共价连接。 2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一抗体表现出高于用等量荧光标记物但没有所述间隔分子制备的第二抗体的荧光发射水平。 3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一抗体表现出高于第二抗体的荧光发射水平，其中所述第一抗体和所述第二抗体各自具有相同数量的共价结合的荧光标记物，并且其中所述第二抗体不具有共价结合的间隔分子。 4.根据权利要求1所述的组合物，其中与不存在所述间隔分子时的猝灭相比，所述间隔分子减少所述荧光标记物的猝灭。 5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子通过反应性基团与所述抗体缀合。 6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述反应性基团是胺基。 7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述胺基在赖氨酸残基上。 8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物通过缀合分子与所述抗体缀合。 9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物带正电荷。 10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物是Alexa染料或DyLightTM染料。 11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物是选自由以下组成的组的染料：Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa 488、Alexa500、Alexa514、Alexa532、Alexa546、Alexa555、Alexa568、Alexa594、Alexa610- X、Alexa633、Alexa647、Alexa660、Alexa680、Alexa700、Alexa750、Alexa790、AMCA-X、630/650、650/665、FL、TMR、TR、TR-X、Cascade二硝基苯基、荧光素、HEX、JOE、Marina Oregon488、Oregon514、PacificBlueTM、Pacific OrangeTM、Rhodamine GreenTM、7、9、21、35、ROX、RhodamineRedTM、TET、TAMRA、四甲基罗丹明、FAM、Texas或7-羟基-9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)琥珀酰亚胺酯(DDAO-SE)。 12.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光标记物是选自由以下组成的组的染料：DyLightTM350、DyLightTM405、DyLightTM488、DyLightTM550、DyLightTM594、DyLightTM633、DyLightTM650、DyLightTM680、DyLightTM755和DyLightTM800。 13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子是带负电荷或中性的。 14.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子选自乙酸酯和聚乙二醇(PEG)。 15.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含乙酰基。 16.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含乙酸酯分子。 17.根据权利要求1所述的组合物，其中所述乙酸酯分子是磺基-NHS-乙酸酯。 18.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含(PEG)n或由(PEG)n组成，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 19.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含MS-(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 20.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子包含选自烷酰基、烯酰基和炔酰基(-C(O)CnHm)的基团或由所述基团组成，其中n是1至20个原子，其中m＞n，其中所述碳原子可以通过单键、双键和/或三键相互连接。 21.根据权利要求1所述的组合物，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被-(OCH2CH2O)x-(CH2)y-OR取代，其中x是1至20，y是1至6，R是H或C1-6烷基。 22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被铵(-NH3+)、季铵((-NR3+)基团取代，其中R是C1-6烷基。 23.根据权利要求1所述的组合物，其中所述荧光染料包含一个或多个Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa 500、Alexa514、Alexa532、Alexa546、Alexa555、Alexa568、Alexa594、Alexa610-X、Alexa633、Alexa647、Alexa660、Alexa680、Alexa700、Alexa750、Alexa790、AMCA-X、630/650、650/665、FL、TMR、TR、TR-X、Cascade二硝基苯基、荧光素、HEX、JOE、MarinaOregon488、Oregon514、Pacific BlueTM、Pacific OrangeTM、Rhodamine GreenTM、7、9、21、35、ROX、Rhodamine RedTM、TET、TAMRA、四甲基罗丹明、FAM、Texas或7-羟基-9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)琥珀酰亚胺酯(DDAO-SE)，和来自由以下组成的组：DyLightTM350、DyLightTM405、DyLightTM488、DyLightTM550、DyLightTM594、DyLightTM633、DyLightTM650、DyLightTM680、DyLightTM755和DyLightTM80；和所述间隔分子包含以下中的一个或多个：磺基-NHS-乙酸酯；(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；MS-(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；烷酰基、烯酰基或炔酰基(-C(O)CnHm)，其中n是1至20个原子，其中m＞n，其中所述碳原子可以通过单键、双键和/或三键相互连接；或烷基、烯基或炔基进一步被-(OCH2CH2O)x-(CH2)y-OR取代，其中x是1至20，y是1至6，R是H或C1-6烷基，或其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被铵(-NH3+)、季铵((-NR3+)基团取代，其中R是C1-6烷基。 24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被鏻基团(-PQ3+)取代，其中Q是芳基、取代的芳基或C1-6烷基。 25.根据权利要求1所述的组合物，其中荧光标记物与抗体的比率为1至50。 26.根据权利要求25所述的组合物，其中荧光标记物与抗体的比率为5至30。 27.根据权利要求25所述的组合物，其中荧光标记物与抗体的比率为1至20。 28.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子与抗体的比率为1至50。 29.根据权利要求28所述的组合物，其中所述间隔分子与抗体的比率为5至30。 30.根据权利要求28所述的组合物，其中所述间隔分子与抗体的比率为5至30。 31.根据权利要求28所述的组合物，其中所述间隔分子与抗体的比率为1至20。 32.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物0.1至25、1至15或2.5至10倍的量摩尔过量的。 33.根据权利要求32所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物2.5倍的量摩尔过量的。 34.根据权利要求33所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物5倍的量摩尔过量的。 35.根据权利要求33所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物7.5倍的量摩尔过量的。 36.根据权利要求33所述的组合物，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物10倍的量摩尔过量的。 37.根据权利要求33所述的组合物，其中所述抗体上由所述多个荧光标记物占据的结合位点的百分比为1％至99％。 38.根据权利要求1所述的组合物，其中所述间隔分子的存在使所述荧光标记物的可检测的萤光增加至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少125％、至少150％、至少200％、至少300％、至少400％或至少500％。 39.一种用于增加荧光标记的生物分子的萤光的方法，所述方法包含： (a)将间隔分子与生物分子缀合；和 (b)将荧光标记物与所述生物分子缀合；其中步骤(a)和(b)可以同时或以任何顺序进行，和其中所述间隔物和荧光标记物彼此不缀合。 40.根据权利要求39所述的方法，其中与不存在所述间隔分子时的猝灭相比，所述间隔分子减少所述荧光标记物的猝灭。 41.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子通过反应性基团与所述抗体缀合。 42.根据权利要求41所述的方法，其中所述反应性基团是胺基。 43.根据权利要求42所述的方法，其中所述胺基在赖氨酸残基上。 44.根据权利要求39所述的方法，其中所述荧光标记物带正电荷。 45.根据权利要求39所述的方法，其中所述荧光染料选自Alexa和DyLightTM。 46.根据权利要求39所述的方法，其中所述荧光标记物选自由以下组成的组：Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa500、Alexa514、Alexa532、Alexa546、Alexa 555、Alexa568、Alexa594、Alexa610-X、Alexa 633、Alexa647、Alexa660、Alexa680、Alexa700、Alexa750、Alexa790、AMCA-X、630/650、650/665、FL、TMR、TR、TR-X、Cascade二硝基苯基、荧光素、HEX、JOE、MarinaOregon 488、Oregon514、Pacific BlueTM、Pacific OrangeTM、Rhodamine GreenTM、7、9、21、35、ROX、Rhodamine RedTM、TET、TAMRA、四甲基罗丹明、FAM、Texas和7-羟基-9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)琥珀酰亚胺酯(DDAO-SE)。 47.根据权利要求39所述的方法，其中所述荧光标记物选自由以下组成的组：DyLightTM350、DyLightTM405、DyLightTM488、DyLightTM550、DyLightTM594、DyLightTM633、DyLightTM650、DyLightTM680、DyLightTM755和DyLightTM800。 48.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子是带负电荷或中性的。 49.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子选自乙酸酯和聚乙二醇(PEG)。 50.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含乙酰基。 51.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含乙酸酯分子。 52.根据权利要求39所述的方法，其中所述乙酸酯分子是磺基-NHS-乙酸酯。 53.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 54.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含MS-(PEG)n，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 55.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子包含选自烷酰基、烯酰基和炔酰基(-C(O)CnHm的基团，其中n是1至20个原子，其中m＞n，其中所述碳原子可以通过单键、双键和/或三键相互连接。 56.根据权利要求55所述的方法，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被-(OCH2CH2O)x-(CH2)y-OR取代，其中x是1至20，y是1至6，R是H或C1-6烷基。 57.根据权利要求55所述的方法，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被铵(-NH3+)、季铵((-NR3+)基团取代，其中R是C1-6烷基。 58.根据权利要求55所述的方法，其中所述烷基、烯基和/或炔基进一步被鏻基团(-PQ3+)取代，其中Q是芳基、取代的芳基或C1-6烷基。 59.根据权利要求39所述的方法，其中荧光标记物与抗体的比率为1至50。 60.根据权利要求59所述的方法，其中荧光标记物与抗体的比率为5至30。 61.根据权利要求59所述的方法，其中荧光标记物与抗体的比率为1至20。 62.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子与蛋白质的比率为1至50。 63.根据权利要求62所述的方法，其中所述间隔分子与蛋白质的比率为5至30。 64.根据权利要求62所述的方法，其中所述间隔分子与蛋白质的比率为5至30。 65.根据权利要求62所述的方法，其中所述间隔分子与蛋白质的比率为1至20。 66.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物0.1至25、1至15或2.5至10倍的量摩尔过量的。 67.根据权利要求66所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物2.5倍的量摩尔过量的。 68.根据权利要求66所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物5倍的量摩尔过量的。 69.根据权利要求66所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物7.5倍的量摩尔过量的。 70.根据权利要求66所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物10倍的量摩尔过量的。 71.根据权利要求39所述的方法，其中所述抗体上由所述多个荧光标记物占据的结合位点的百分比为1％至99％。 72.根据权利要求39所述的方法，其中所述间隔分子的存在使所述荧光标记物的可检测的萤光增加至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少125％、至少150％、至少200％、至少300％、至少400％或至少500％。 73.一种鉴定能够增强荧光标记的生物分子荧光发射的间隔分子的方法，所述方法包含： (a)独立于与所述生物分子缀合的多个荧光标记物，将间隔分子与生物分子缀合； (b)测试除了与所述生物分子缀合的所述多个荧光标记物之外是否存在所述间隔分子增加了所述多个荧光标记物的可检测荧光；和 (c)除了与所述生物分子缀合的所述多个荧光标记物之外，当所述间隔分子的存在增加了所述多个荧光标记物的可检测荧光时，将所述间隔分子鉴定为将减少与所述蛋白质缀合的所述荧光标记物的猝灭的间隔分子。 74.根据权利要求73所述的方法，其中所述间隔分子在所述生物分子上存在的初级赖氨酸侧链与所述生物分子缀合。 75.根据权利要求73所述的方法，其中所述生物分子是抗体或抗体片段。 76.根据权利要求73所述的方法，其中所述多个荧光标记物带正电荷。 77.根据权利要求73所述的方法，其中所述间隔分子带正电荷。 78.根据权利要求73所述的方法，其中所述多个荧光标记物带负电荷。 79.根据权利要求73所述的方法，其中所述间隔分子带负电荷。 80.根据权利要求73所述的方法，其中所述多个荧光标记物是选自Alexa 和DyLightTM分子的染料。 81.根据权利要求73所述的方法，其中所述多个荧光标记物选自Alexa 350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa500、Alexa514、Alexa532、Alexa546、Alexa555、Alexa568、Alexa594、Alexa610-X、Alexa633、Alexa647、Alexa660、Alexa680、Alexa700、Alexa 750、Alexa790、AMCA-X、630/650、 650/665、FL、TMR、TR、TR-X、Cascade二硝基苯基、荧光素、HEX、JOE、MarinaOregon488、Oregon514、Pacific BlueTM、Pacific OrangeTM、Rhodamine GreenTM、7、9、21、35、ROX、Rhodamine RedTM、TET、TAMRA、四甲基罗丹明、FAM、Texas和7-羟基-9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)琥珀酰亚胺酯(DDAO-SE)。 82.根据权利要求73所述的方法，其中所述多个荧光标记物选自DyLightTM350、DyLightTM405、DyLightTM488、DyLightTM550、DyLightTM594、DyLightTM633、DyLightTM650、DyLightTM680、DyLightTM755和DyLightTM800。 83.根据权利要求73所述的方法，其中所述间隔分子是选自乙酸酯和PEG。 84.根据权利要求73所述的方法，其中所述多个荧光标记物通过缀合分子与所述抗体缀合。 85.根据权利要求73所述的方法，其中所述多个荧光标记物在初级赖氨酸侧链与所述抗体缀合。 86.根据权利要求73所述的方法，其中所述间隔分子在初级赖氨酸侧链与所述抗体缀合。 87.根据权利要求73所述的方法，其中所述多个荧光标记物与所述抗体的所述染料与蛋白质的比率为1至50。 88.根据权利要求87所述的方法，其中所述多个荧光标记物与所述抗体的所述染料与蛋白质的比率为5至30。 89.根据权利要求87所述的方法，其中所述多个荧光标记物与所述抗体的所述染料与蛋白质的比率为1至20。 90.根据权利要求73所述的方法，其中所述间隔分子与蛋白质的比率为1至50。 91.根据权利要求90所述的方法，其中所述间隔分子与蛋白质的比率为5至30。 92.根据权利要求90所述的方法，其中所述间隔分子与蛋白质的比率为5至30。 93.根据权利要求90所述的方法，其中所述间隔分子与蛋白质的比率为1至20。 94.根据权利要求73所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物0.1至25、1至15或2.5至10倍的量摩尔过量的。 95.根据权利要求94所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物2.5倍的量摩尔过量的。 96.根据权利要求94所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物5倍的量摩尔过量的。 97.根据权利要求94所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物7.5倍的量摩尔过量的。 98.根据权利要求94所述的方法，其中所述间隔分子是以相对于所述多个荧光标记物10倍的量摩尔过量的。 99.根据权利要求73所述的方法，其中所述抗体上由所述多个荧光标记物占据的结合位点的百分比为1％至99％。 100.根据权利要求99所述的方法，其中所述间隔分子的存在使所述荧光标记物的可检测的萤光增加至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少125％、至少150％、至少200％、至少300％、至少400％或至少500％。 101.一种用于确定在生物样品中存在所需目标的方法，所述方法包含： (a)使所述生物样品与抗体组合物接触，其中两个或更多个荧光标记物和两个或更多个间隔分子共价连接至所述抗体，其中所述荧光分子和间隔分子彼此不共价连接， (b)检测由所述多个荧光标记物发射的荧光；和 (c)当检测到由所述多个荧光标记物发射的荧光时，确定所述生物样品中存在所述所需目标。 102.根据权利要求101所述的方法，其中所述生物样品包含细胞裂解物。 103.根据权利要求101所述的方法，其中所述生物样品包含完整的细胞。 104.根据权利要求101所述的方法，其中所述生物样品包含分离的蛋白质。 105.根据权利要求101所述的方法，其中所述生物样品包含重组蛋白质。 106.根据权利要求101所述的方法，其中所述生物样品固定在固体支撑物上。 107.根据权利要求101所述的方法，其中所述生物样品包含流体中的完整细胞。 108.根据权利要求101所述的方法，其中所述生物样品是活动物。 109.根据权利要求108所述的方法，其中所述活动物是哺乳动物。 110.一种包含第一核酸分子的组合物，其中两个或更多个荧光标记物和两个或更多个间隔分子共价连接到所述第一核酸分子，和其中所述荧光分子和间隔分子彼此不共价连接。 111.根据权利要求110所述的组合物，其中所述第一核酸分子表现出高于用等量荧光标记物但没有所述间隔分子制备的第二核酸分子的荧光发射水平。 112.根据权利要求110所述的组合物，其中所述第一核酸分子表现出比第二核酸分子更高的荧光发射水平，其中所述第一核酸分子和所述第二核酸分子各自具有相同数量的共价结合的荧光标记物，并且其中所述第二核酸分子不具有共价结合的间隔分子。 113.一种包含与多个荧光标记物缀合的抗体的缀合抗体，其中所述缀合抗体包含以下特征中的一个或多个： (a)基于每个荧光标记物的荧光比率等于或大于0.5， (b)至少四个荧光标记物与所述抗体缀合，和/或 (c)所述抗体的总荧光比未缀合的荧光分子的荧光高至少20％。 114.根据权利要求113所述的缀合抗体，其中所述荧光标记物通过一个或多个多臂聚合物与所述抗体缀合。 115.根据权利要求114所述的缀合抗体，其中所述荧光标记物通过一个多臂聚合物与所述抗体缀合。 116.根据权利要求114所述的缀合抗体，其中所述荧光标记物通过两个至十个多臂聚合物与所述抗体缀合。 117.根据权利要求116所述的缀合抗体，其中两个或更多个荧光标记物与所述抗体缀合。 118.根据权利要求113所述的缀合抗体，其中所述多臂聚合物的臂由选自由以下组成的组的类型的化学物质构成： (a)聚乙二醇， (b)多糖，和 (c)多肽。 119.根据权利要求113所述的缀合抗体，其中所述荧光标记物之间的平均刷子距离是200至800埃。 120.根据权利要求113所述的缀合抗体，其中所述荧光标记物与所述抗体分隔开至少16个共价键。 121.根据权利要求120所述的缀合抗体，其中所述荧光标记物与所述抗体分隔开16至800个共价键。 122.根据权利要求120所述的缀合抗体，其中所述荧光标记物是选自由以下组成的组的染料：Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa500、Alexa514、Alexa532、Alexa 546、Alexa555、Alexa568、Alexa594、Alexa610-X、Alexa633、Alexa647、Alexa660、Alexa680、Alexa700、Alexa750、Alexa790、AMCA-X、630/650、650/665、FL、TMR、TR、TR-X、Cascade二硝基苯基、荧光素、HEX、JOE、MarinaOregon488、Oregon514、Pacmc BlueTM、PacificOrangeTM、Rhodamine GreenTM、7、9、21、35、ROX、RhodamineRedTM、TET、TAMRA、四甲基罗丹明、FAM、Texas或7-羟基-9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)琥珀酰亚胺酯(DDAO-SE)；和来自由以下组成的组的荧光标记物：DyLightTM350、DyLightTM405、DyLightTM488、DyLightTM550、DyLightTM594、DyLightTM633、DyLightTM650、DyLightTM680、DyLightTM755和DyLightTM800以及聚乙二醇化DyLightTM染料。 123.一种制备荧光标记的生物分子的方法，所述方法包含： (a)将反应性基团和两个或更多个荧光标记物缀合到间隔分子上，从而形成荧光标记的间隔分子，和 (b)将所述荧光标记的间隔分子与所述生物分子缀合，从而形成所述荧光标记的生物分子，以及其中所述荧光标记的生物分子的各个荧光标记物具有基于每个荧光标记物等于或大于0.5的荧光比率。 124.根据权利要求123所述的方法，其中平均1至10个荧光标记的间隔分子与每个生物分子缀合。 125.根据权利要求123所述的方法，其中平均3至10个荧光标记的间隔分子与每个生物分子缀合。 126.根据权利要求123所述的方法，其中所述荧光标记的间隔分子是多臂聚合物。 127.根据权利要求126所述的方法，其中多臂聚合物是分支聚乙二醇分子。 128.根据权利要求126所述的方法，其中所述多臂聚合物与4至10个荧光标记物缀合。 129.根据权利要求126所述的方法，其中所述多臂聚合物的分子量为4,000至80,000道尔顿。 130.一种检测荧光标记的生物分子的方法，所述方法包含： (a)用激发与所述生物分子缀合的荧光标记物的光暴露所述荧光标记的生物分子，和 (b)检测由与所述生物分子缀合的所述荧光标记物产生的发射光，其中所述荧光标记的生物分子与四个或更多个荧光标记物缀合和其中所述荧光标记的生物分子的各个荧光标记物具有基于每个荧光标记物等于或大于0.7的荧光比率。 131.根据权利要求130所述的方法，其中所述荧光标记的生物分子是抗体。
所属类别：	发明专利