详情

原文传递一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法

专利名称：	一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法
摘要：	本发明公开了一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法。所述分析方法以蛋白包裹的荧光金纳米簇作为荧光信号探针，是酶标抗原上的葡萄糖氧化酶催化底物葡萄糖产生过氧化氢使体系中荧光金纳米簇的荧光猝灭，利用目标物和酶标抗原竞争结合在微孔板上的抗体，从而使体系的荧光发射光谱发生变化，可用于灵敏定量检测目标物分子。本发明所采用的荧光金纳米簇对葡萄糖氧化酶响应灵敏，同时免标记技术使荧光金纳米簇在本体系应用中的可控性、稳定性得到大大提高。本方法所构建的体系具有操作简便、灵敏度高、稳定性好、成本低廉等优点，可应用于灵敏定量检测动物饲料中的喹乙醇残留。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国农业大学
发明人：	江海洋;彭涛;沈建忠;王战辉;温凯;王见一;史为民;李建成;孙淑娟
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-04T00:00:00+0800
申请号：	CN201711188784.5
公开号：	CN109839500A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	关畅;王春霞
分类号：	G01N33/533(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100083 北京市海淀区清华东路17号
主权项：	1.一种基于荧光金纳米簇的免标记荧光酶联免疫分析方法，包括如下步骤： (1)向培养板中加入包被原进行包被，再加入目标物分子的单克隆抗体进行反应，然后加入封闭液进行封闭处理； (2)分别向所述培养板中加入葡萄糖氧化酶-目标物分子复合物和所述目标物分子的标准溶液进行反应； (3)向所述培养板中加入葡萄糖溶液进行反应； (4)向所述培养板中加入荧光金纳米簇和硫酸亚铁溶液进行反应； (5)测定所述培养板中的混合液在365nm激发波长下，650nm波长处的荧光强度变化；根据所述目标物分子的标准溶液的浓度与其荧光强度的变化值，制作标准曲线； (6)分别向所述培养板中加入所述葡萄糖氧化酶-目标物分子复合物和待测样品的提取液进行反应；重复步骤(3)-(5)，得到在365nm激发波长下，650nm波长处的荧光强度变化值，再根据所述标准曲线，即得到所述待测样品的提取液中所述目标物分子的浓度。 2.根据权利要求1所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：所述目标物分子为喹噁啉类药物；所述待测样品为饲料或肉制品。 3.根据权利要求2所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：所述喹噁啉类药物为喹乙醇。 4.根据权利要求3所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：所述葡萄糖氧化酶-目标物分子复合物为葡萄糖氧化酶-喹乙醇复合物，按照如下方法制备：所述喹乙醇和琥珀酸酐进行反应，向所述反应后的体系中加入水经冷却出现沉淀物，离心收集沉淀；所述沉淀与碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺进行反应，然后加入葡萄糖氧化酶的溶液进行反应，即得所述葡萄糖氧化酶-喹乙醇复合物。 5.根据权利要求4所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：所述喹乙醇与所述葡萄糖氧化酶的摩尔比为10～33：1；采用PBS缓冲液配制所述葡萄糖氧化酶的溶液。 6.根据权利要求1-5中任一项所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：所述荧光金纳米簇为蛋白包裹的荧光金纳米簇；所述蛋白包裹的荧光金纳米簇是按照包括如下步骤的方法制备的：将所述蛋白和氯金酸溶液等体积混合进行反应，然后加入NaOH溶液，继续反应即得；所述蛋白的浓度为50mg/ml，所述氯金酸溶液的质量百分含量为0.5％；所述NaOH溶液的加入量为所述蛋白和所述氯金酸溶液的总体积的1/10；所述蛋白为牛血清白蛋白。 7.根据权利要求1-6中任一项所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：步骤(2)中，所述目标物分子的标准溶液的浓度为0～200μg/l。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：步骤(3)中，所述葡萄糖溶液的浓度为0.8～1.2mg/ml。 9.根据权利要求1-8中任一项所述的免标记荧光酶联免疫分析方法，其特征在于：步骤(4)中，所述硫酸亚铁溶液的浓度为450～500μM。
所属类别：	发明专利