详情

原文传递神经干细胞的标记物

专利名称：	神经干细胞的标记物
摘要：	本申请涉及用于基于标记物整联蛋白α10β1的表达检测并分离神经干细胞(NSC)或神经祖细胞(NPC)群体的方法；以及所述NSC或NPC群体用于CNS的疾病和损害的疗法、诊断和预后的用途。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	瑞典;SE
申请人：	辛特拉股份公司
发明人：	E·伦德格伦阿克隆;K·施梅拉斯卡马萨米
专利状态：	有效
申请日期：	2017-08-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-04T00:00:00+0800
申请号：	CN201780063532.1
公开号：	CN109844533A
代理机构：	北京坤瑞律师事务所
代理人：	封新琴
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	瑞典隆德
主权项：	1.包括由神经干细胞和/或神经祖细胞表达的整联蛋白α10亚基的标记物作为针对哺乳动物神经干细胞和哺乳动物神经祖细胞的标记物的用途。 2.一种用于鉴定哺乳动物神经干细胞和/或哺乳动物神经祖细胞的方法，该方法包括以下步骤： a)提供包含神经组织的样品， b)检测由a)的该样品中包含的细胞进行的整联蛋白α10亚基的表达， c)对b)的整联蛋白α10亚基表达进行评分，并且 d)根据c)中的评分鉴定该哺乳动物神经干细胞和/或该神经祖细胞。 3.一种用于分离哺乳动物神经干细胞和/或哺乳动物神经祖细胞的方法，该方法包括以下步骤： a)提供包含神经组织的样品， b)检测由a)的该样品中包含的细胞进行的整联蛋白α10亚基的表达， c)对b)的整联蛋白α10亚基表达进行评分，并且 d)根据c)中的评分选择该哺乳动物神经干细胞和/或该哺乳动物神经祖细胞。 4.根据前述权利要求中任一项的方法或用途，其中该整联蛋白α10亚基在该哺乳动物神经干细胞和/或该神经祖细胞的细胞表面上表达。 5.根据前述权利要求中任一项的方法或用途，其中该整联蛋白α10亚基在哺乳动物神经干细胞和/或神经祖细胞中在细胞内表达。 6.根据前述权利要求中任一项的方法或用途，其中该整联蛋白α10作为与整联蛋白β1亚基组合的异源二聚体表达。 7.根据前述权利要求中任一项的方法或用途，其还包括在b)的检测之前将该样品与特异性地结合整联蛋白α10亚基的抗体接触的步骤。 8.根据前述权利要求中任一项的方法或用途，其还包括检测选自以下的第二标记物的表达：巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDFGRα、SOX-2、CD133(凸素-1)、CD15、CD24、Musashi、EGFR、双皮质素(DCX)、Pax6、FABP7、LeX、波形蛋白和GLAST。 9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该方法在体外进行。 10.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该神经组织包含神经干细胞和/或神经祖细胞。 11.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该神经组织获得自或衍生自脑组织。 12.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该神经组织是成体脑组织。 13.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该神经组织是胎儿脑组织。 14.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该神经组织衍生自室下区(SVZ)或颗粒细胞下层(SGZ)或脑膜。 15.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该神经组织选自人类、犬科动物、马科动物、牛科动物、猫科动物、鼠、绵羊或猪神经组织。 16.根据前述权利要求中任一项的方法，其中对由细胞对整联蛋白α10亚基的表达的检测是通过流式细胞术确定的。 17.根据前述权利要求中任一项的方法，其中对由细胞对整联蛋白α10亚基的表达的检测是通过测量整联蛋白α10蛋白表达确定的。 18.根据前述权利要求中任一项的方法，其中对由细胞对整联蛋白α10亚基的表达的检测是通过测量整联蛋白α10mRNA表达确定的。 19.根据前述权利要求中任一项的方法，其中对由细胞对整联蛋白α10亚基的表达的检测是通过选自免疫测定、免疫沉淀、流式细胞术、免疫荧光、和蛋白质印迹的方法确定的。 20.根据前述权利要求中任一项的方法，其中用于检测细胞对整联蛋白α10亚基的表达的抗体是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体或其片段。 21.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该抗体是单克隆抗体。 22.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该抗体是非人类抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、人源化抗体或人类抗体。 23.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该抗体共价结合到可检测部分，诸如选自荧光团、酶或放射性示踪剂或放射性同位素的可检测部分。 24.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该抗体具有选自IgA、IgD、IgG和IgM的同种型。 25.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该抗体是：a)单克隆抗体，其通过以登录号DSM ACC2583在德国微生物和细胞培养物保藏中心处保藏的杂交瘤细胞系产生；或 b)竞争结合到与通过以登录号DSM ACC2583在德国微生物和细胞培养物保藏中心处保藏的杂交瘤产生的单克隆抗体所结合的表位相同的表位的抗体；或 c)a)或b)的片段，其中所述片段能够特异性地结合到该整联蛋白α10亚基链的细胞外I结构域。 26.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该抗体附接到固体支持物。 27.根据前述权利要求中任一项的方法，其中将该抗体用一种或多种荧光团标记。 28.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该荧光团是藻红蛋白、别藻蓝蛋白、荧光素、德克萨斯红、或Alexa Fluor 647、亮色染料。 29.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该抗体还包含适用于检测的部分。 30.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该适用于检测的部分选自纳米颗粒、和放射性同位素。 31.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该纳米颗粒选自胶团、非弹性壳、纳米管状颗粒、脂质体、金纳米颗粒以及聚合物。 32.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该放射性同位素选自β-发射体、俄歇-发射体、转换电子发射体、α-发射体、以及低光子能量发射体。 33.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该可检测部分包括顺磁性同位素或由其组成。 34.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该顺磁性同位素选自157Gd、55Mn、162Dy、52Cr和56Fe。 35.根据前述权利要求中任一项的方法，其中该可检测部分是通过成像技术诸如SPECT、PET、MRI、光学或超声成像可检测的。 36.一种用于确定测试化合物是否调节体外哺乳动物神经干细胞和/或哺乳动物神经祖细胞分化的方法，该方法包括以下步骤： a)提供表达整联蛋白α10亚基或具有表达整联蛋白α10亚基的能力的神经干细胞和/或神经祖细胞， b)将该神经干细胞和/或该神经祖细胞与测试化合物接触，并且 c)检测该神经干细胞和/或该神经祖细胞的分化速率或分化模式的变化作为该测试化合物调节神经干细胞和/或神经祖细胞分化的指示，其中该分化速率或分化模式是通过根据权利要求2至35中任一项的方法检测该细胞对整联蛋白α10的表达来确定的。 37.一种用于制造相对于参考群体富集神经干细胞和/或神经祖细胞的体外哺乳动物细胞的分离群体的方法，该方法包括以下步骤： a)至少提供包含神经干细胞和/或神经祖细胞的细胞群体的一部分或参考群体的一部分， b)将鉴定由该神经干细胞和/或该神经祖细胞表达的整联蛋白α10亚基的化合物引入到以上a)中的细胞群体中， c)从以上步骤b)中的细胞群体选择并分离、或分离并选择、或分离、或选择该神经干细胞和/或该神经祖细胞，从而产生富集神经干细胞和/或神经祖细胞的细胞群体。 38.根据权利要求37的方法，其中该神经干细胞和/或该神经祖细胞是通过根据权利要求2至35中任一项定义的方法鉴定和/或分离的。 39.根据权利要求37和38中任一项的方法，其中步骤c)中的选择是通过荧光细胞分选或磁珠分选进行的。 40.一种表达整联蛋白α10亚基的未分化哺乳动物细胞的体外细胞培养物，其中该细胞衍生自神经组织并且其中 a)该培养物中的细胞当在基本上不含如在(b)中定义的血清和增殖诱导生长因子两者的培养基中分化时，具有分化为神经元和/或少突胶质细胞和/或星形胶质细胞的能力，以产生至少10％神经元和/或少突胶质细胞和/或星形胶质细胞的细胞培养物； b)该细胞培养物在含有血清替代物诸如B27和至少一种增殖诱导生长因子的培养基中分裂； c)在撤出该血清替代物和该增殖诱导生长因子两者后，该培养物中的细胞分化为神经元和/或少突胶质细胞和/或星形胶质细胞。 41.一种体外细胞培养物，其包含： a)含有血清替代物诸如B27和至少一种增殖诱导生长因子的培养基；以及 b)衍生自哺乳动物的中枢神经系统的未分化哺乳动物细胞，其中至少10％、优选地至少20％、优选地至少30％、优选地至少40％、优选地至少50％、优选地至少60％、优选地至少70％、优选地至少80％、优选地至少90％的该细胞表达整联蛋白α10亚基。 42.一种表达整联蛋白α10亚基的哺乳动物未分化细胞的悬浮培养物，其中所述细胞基本上形成为细胞聚集体，并且其中该细胞聚集体被维持在含有增殖诱导生长因子的培养基中。 43.一种通过根据权利要求3至28中任一项的方法可获得的细胞培养物。 44.根据权利要求40至42中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该整联蛋白α10作为与整联蛋白β1链组合的异源二聚体表达。 45.根据权利要求40至44中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该整联蛋白α10亚基在该未分化哺乳动物细胞的细胞表面上表达。 46.根据权利要求40至45中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该整联蛋白α10亚基在该未分化哺乳动物细胞中在细胞内表达。 47.根据权利要求40至46中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中至少10％、优选地至少20％、优选地至少30％、优选地至少40％、优选地至少50％、优选地至少60％、优选地至少70％、优选地至少80％、优选地至少90％的该未分化哺乳动物细胞是表达整联蛋白α10亚基的哺乳动物神经干细胞。 48.根据权利要求40至47中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该未分化哺乳动物细胞是神经干细胞或神经祖细胞。 49.根据权利要求40至48中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该培养物中的细胞的一部分还表达选自以下的至少一种标记物：巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、SOX2、PDGFRα、CD133、CD15、CD24、Musashi、EGFR、双皮质素(DCX)、Pax6、FABP7和GLAST。 50.根据权利要求40至49中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该至少一种增殖诱导生长因子选自表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、转化生长因子α(TGF-α)、白血病抑制因子(LIF)、睫状神经营养因子(CNTF)、脑衍生神经营养因子(BDNF)、PDGFα或其组合。 51.根据权利要求40至50中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该培养物中的细胞获得自或衍生自哺乳动物脑的室下区(SVZ)或颗粒细胞下层(SGZ)或脑膜。 52.根据权利要求40至51中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该培养物中的细胞是鼠细胞。 53.根据权利要求40至52中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该培养物中的细胞是人类细胞。 54.根据权利要求40至53中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该培养物中的细胞衍生自人类胎儿或人类成体神经干细胞和/或神经祖细胞。 55.根据权利要求40至54中任一项的细胞培养物或悬浮培养物，其中该培养物中的细胞不衍生自人类胚胎细胞或人类胚胎。 56.一种在有需要的受试者中治疗神经系统的疾病或损害和/或预防神经系统的损害并保护神经系统免受损害的方法，该方法包括： a)提供包含哺乳动物神经干细胞和/或哺乳动物神经祖细胞的富集群体的组合物，其中该细胞表达整联蛋白α10亚基； b)向该受试者给予治疗有效量的哺乳动物神经干细胞和/或神经祖细胞的分离群体，从而治疗中枢神经系统的疾病或损害和/或预防中枢神经系统的损害并保护中枢神经系统免受损害。 57.一种在有需要的受试者中治疗精神和行为障碍的方法，该方法包括： a)提供包含哺乳动物神经干细胞和/或哺乳动物神经祖细胞的富集群体的组合物，其中该细胞表达整联蛋白α10亚基； b)向该受试者给予治疗有效量的哺乳动物神经干细胞和/或神经祖细胞的分离群体，从而治疗具有精神症状的神经障碍。 58.一种在有需要的受试者中治疗神经系统的疾病或损害和/或预防神经系统的损害并保护神经系统免受损害的方法，该方法包括： a)提供包含哺乳动物间充质干细胞的富集群体的组合物，其中该细胞表达整联蛋白α10亚基； b)向该受试者给予治疗有效量的哺乳动物间充质干细胞的分离群体，从而治疗中枢神经系统的疾病或损害和/或预防中枢神经系统的损害并保护中枢神经系统免受损害。 59.一种在有需要的受试者中治疗精神或行为障碍的方法，该方法包括： a)提供包含哺乳动物间充质干细胞的富集群体的组合物，其中该细胞表达整联蛋白α10亚基； b)向该受试者给予治疗有效量的哺乳动物间充质干细胞的分离群体，从而治疗具有精神症状的神经障碍。 60.根据权利要求58和59中任一项的方法，其中该哺乳动物间充质干细胞从以下分离：骨髓或脂肪组织或脐带血或华顿氏胶或牙髓或脊髓组织或血液或羊水或羊膜或子宫内膜或肢芽或唾腺或皮肤或包皮或滑膜。 61.一种用于确定有需要的患者中CNS的受损或患病区域的特征的体外方法，该方法包括以下步骤： a)向受试者给予抗整联蛋白α10亚基， b)检测该受试者的CNS的受损或患病区域中整联蛋白α10亚基的表达， c)确定该CNS的受损或患病区域的特征诸如位置和大小。 62.根据权利要求61的方法，其中该神经组织包含神经干细胞和/或神经祖细胞。 63.根据权利要求61的方法，其中该特征用于预测中风之后CNS组织的再生程度。 64.根据权利要求61至63中任一项的方法，其中整联蛋白α10亚基的高表达值对应于低的改良Rankin量表(mRS)值。 65.根据权利要求61至64中任一项的方法，其中该整联蛋白α10亚基用于生物标记物组中。 66.一种针对哺乳动物神经干细胞和/或哺乳动物神经祖细胞的标记物，其包括由该神经干细胞和/或该神经祖细胞表达的整联蛋白α10链亚基，该标记物用于在治疗神经系统的疾病或损害和/或预防神经系统的损害并保护神经系统免受损害和/或治疗精神和行为障碍、或诊断和/或表征该疾病或损害的方法中使用。 67.一种包含表达整联蛋白α10亚基的哺乳动物神经干细胞和/或哺乳动物神经祖细胞的分离群体的组合物，其用于在治疗神经系统的疾病或损害和/或精神和行为障碍的方法中使用。 68.根据权利要求56至67中任一项的方法、标记物或组合物，其中该整联蛋白α10作为与整联蛋白β1链组合的异源二聚体表达。 69.根据权利要求56至68中任一项的方法、标记物或组合物，其中该整联蛋白α10亚基在该哺乳动物神经干细胞和/或该神经祖细胞的细胞表面上表达。 70.根据权利要求56至69中任一项的方法、标记物或组合物，其中该整联蛋白α10亚基在哺乳动物神经干细胞和/或神经祖细胞中在细胞内表达。 71.根据权利要求56至70中任一项的方法、标记物或组合物，其中该细胞群体富集表达整联蛋白α10亚基的哺乳动物神经干细胞和/或哺乳动物神经祖细胞。 72.根据权利要求56至71中任一项的方法、标记物或组合物，其中神经系统的疾病或损害是中枢或外周神经系统损伤或神经变性疾病。 73.根据权利要求56至72中任一项的方法、标记物或组合物，其中该神经系统损伤选自脊髓损伤(SCI)、创伤性脑损伤(TBI)、外周神经损伤、中风和脑癌。 74.根据权利要求56至73中任一项的方法、标记物或组合物，其中该神经系统损伤是中风。 75.根据权利要求56至73中任一项的方法、标记物或组合物，其中该神经变性疾病选自阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿氏病(HD)、多发性硬化症(MS)以及多系统萎缩症。 76.根据权利要求56至73中任一项的方法、用于使用的标记物、或组合物，其中该精神或行为障碍选自雷特综合征、精神分裂症、抑郁症、孤独症谱系障碍(ASD)以及双相型障碍(BPD)。 77.根据权利要求56至73中任一项的方法、用于使用的标记物、或组合物，其中所述神经干细胞是使用如权利要求2至55中任一项定义的方法分离的，或者其中所述神经干细胞是如权利要求2至55中任一项定义的。 78.根据前述权利要求中任一项的方法、用于使用的标记物、或组合物，其中该神经干细胞是同种异体神经干细胞。 79.根据前述权利要求中任一项的方法、用于使用的标记物、或组合物，其中该神经干细胞是自体神经干细胞。 80.根据前述权利要求中任一项的方法、用于使用的标记物、或组合物，其中该神经祖细胞是同种异体神经祖细胞。 81.根据前述权利要求中任一项的方法、用于使用的标记物、或组合物，其中该神经祖细胞是自体神经祖细胞。 82.根据前述权利要求中任一项的方法、用于使用的标记物、或组合物，其中该间充质干细胞是同种异体间充质干细胞。 83.根据前述权利要求中任一项的方法、用于使用的标记物、或组合物，其中该间充质干细胞是自体间充质干细胞。
所属类别：	发明专利