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一种改良的荧光蛋白转基因小鼠组织荧光成像方法
| 专利名称： | 一种改良的荧光蛋白转基因小鼠组织荧光成像方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种改良的荧光蛋白转基因小鼠组织荧光成像方法。通过在低温下短暂固定后，将荧光蛋白转基因小鼠组织经高浓度Triton短时漂洗提高通透性后，再经穿透力较强的荧光染料Hoescht染核，最后通过共聚焦显微镜扫描构建荧光蛋白表达的立体图像。本发明中低温短暂固定组织的方法既最大程度的保存了荧光蛋白的活性，又避免了组织在后续的实验操作中变质破碎；高浓度Triton短时漂洗增加组织通透性，极大提高了Hoescht染核效率，使共聚焦成像时组织中目标结构定位成为可能。通过该技术所构建的3D共聚焦影像，信号连续完整、图像质量高。是一种简便易行、成本低廉的方法。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 湖北;42 |
| 申请人： | 武汉大学 |
| 发明人： | 杨哲琼;奚瑾磊;张玉峰;乐江 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-12-20T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-06-07T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201811563494.9 |
| 公开号： | CN109856093A |
| 代理机构： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) |
| 代理人： | 彭劲松 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学 |
| 主权项： | 1.一种改良的荧光蛋白转基因小鼠组织荧光成像方法，其特征在于，依次包括如下步骤： （1）解剖获取目的基因启动子驱动表达的荧光蛋白转基因小鼠组织块； （2）组织块经4%多聚甲醛4度短暂固定； （3）已固定的组织块经高浓度Triton短时漂洗； （4）组织块浸于Hoescht 33342中4度染核过夜； （5）共聚焦显微镜Z-Stack扫描，并构建组织中目的基因表达立体图像。 2.根据权利要求1所述的改良的荧光蛋白转基因小鼠组织荧光成像方法，其特征在于，所述的荧光蛋白为GFP、RFP、YFP中的任意一种。 3.根据权利要求2所述的改良的荧光蛋白转基因小鼠组织荧光成像方法，其特征在于，所述的荧光蛋白为GFP，所述的组织为牙胚组织时，依次包括如下步骤： （1）解剖获取目的基因启动子驱动的GFP转基因新生至出生后7日小鼠切牙末端组织块，即牙胚组织块，于1×PBS中室温下漂洗后，浸泡于4%多聚甲醛中，置于4度缓慢振荡，固定5分钟，固定完成后，于1×PBS中室温下漂洗； （2）将已固定的组织块于1×PBS-0.5%Triton中短时漂洗； （3）再将牙胚组织块浸泡于终浓度为5 µg/mL荧光染料Hoescht 33342中，置于4度缓慢振荡，染核16小时，染核完成后，于1×PBS中室温下漂洗； （4）将已经上述处理的组织块置于含自制凹槽的载玻片凹槽内，在凹槽内滴入一滴Vectashield浸润组织块，作为共聚焦成像的折光媒介，然后在凹槽上加盖盖玻片； （5）使用共聚焦显微镜对组织块进行Z-Stack扫描，并使用所获图像构建牙胚组织块中目的基因表达的立体影像。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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