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原文传递循环肿瘤细胞的捕获方法及捕获试剂盒

专利名称：	循环肿瘤细胞的捕获方法及捕获试剂盒
摘要：	本发明公开了一种循环肿瘤细胞的捕获方法及捕获试剂盒。其中，该捕获方法包括以下步骤：S1，利用淋巴细胞分离液对外周血中的细胞进行分离，取得白膜层细胞；S2，利用EpCAM抗体和Vimentin抗体捕获白膜层细胞中的循环肿瘤细胞。应用本发明的技术方案，通过增加间质型标记(Vimentin，波形蛋白)抗体，与EpCAM抗体混合后进行CTC的捕获，不仅能够捕获常规的上皮型CTC，还能捕获危险性更大的发生了EMT转化的CTC，能够极大的提高捕获效率，提高CTC的检出率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京优迅医学检验实验室有限公司
发明人：	骆靖华;王燕;刘霞;方楠;王建伟;伍启熹;刘倩;刘珂弟;唐宇
专利状态：	有效
申请日期：	2018-11-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201811447767.3
公开号：	CN109856388A
代理机构：	北京康信知识产权代理有限责任公司
代理人：	韩建伟;金田蕴
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100195 北京市海淀区四季青杏石口路65号益园C区C7
主权项：	1.一种循环肿瘤细胞的捕获方法，其特征在于，包括以下步骤： S1，利用淋巴细胞分离液对外周血中的细胞进行分离，取得白膜层细胞； S2，利用EpCAM抗体和Vimentin抗体捕获所述白膜层细胞中的循环肿瘤细胞。 2.根据权利要求1所述的捕获方法，其特征在于，所述S2具体包括中，向含有所述白膜层细胞的液体中加入EpCAM抗体和Vimentin抗体，孵育后，弃上清，重悬抗体细胞混合物加入链霉亲和素磁珠或亲和素磁珠孵育，与链霉亲和磁珠或亲和素磁珠结合的细胞为最终捕获到的循环肿瘤细胞。 3.根据权利要求2所述的捕获方法，其特征在于，所述S2中：重悬抗体细胞混合物加入链霉亲和素磁珠孵育后还包括将磁珠抗体细胞混合物贴在磁力架上，待上清清澈后，将上清吸出，加入洗涤液混匀后再次贴在磁力架上，待上清清澈后，将上清吸出，重复操作多次，得到所述循环肿瘤细胞。 4.根据权利要求2所述的捕获方法，其特征在于，在所述S1和S2之间还包括：去除所述白膜层细胞中的白细胞，得到第一上清液；所述第一上清液即为含有所述白膜层细胞的液体；优选的，利用CD45磁珠去除所述白膜层细胞中的白细胞。 5.根据权利要求1所述的捕获方法，其特征在于，所述淋巴细胞分离液为Ficoll淋巴细胞分离液。 6.根据权利要求5所述的捕获方法，其特征在于，所述S1具体包括：用PBS将所述外周血进行稀释，得到稀释后的外周血；所述Ficoll淋巴细胞分离液盛放在离心管中，将所述稀释后的外周血加入所述Ficoll淋巴细胞分离液的上层，室温离心，取中间的白膜层用PBS进行洗涤，得到所述白膜层细胞。 7.根据权利要求1所述的捕获方法，其特征在于，所述捕获方法还包括：S4，免疫荧光染色检测捕获的细胞数量。 8.根据权利要求7所述的捕获方法，其特征在于，所述S4具体包括： S41，将分离得到的所述循环肿瘤细胞固定后用DAPI荧光染料标记细胞核； S42，用CD45绿色荧光抗体标记细胞； S43，用CKmix、EpCAM、vimentin红色荧光抗体标记细胞； S44，在三色荧光显微镜下进行结果分析，将DAPI+、CD45-、CKmix+或EpCAM+或vimentin+的细胞定义为CTCs。 9.一种循环肿瘤细胞的捕获试剂盒，其特征在于，包括：淋巴细胞分离液、CD45磁珠和EpCAM抗体。 10.根据权利要求9所述的捕获试剂盒，其特征在于，所述捕获试剂盒还包括Vimentin抗体；优选的，所述捕获试剂盒还包括链霉亲和磁珠或亲和素磁珠。
所属类别：	发明专利