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原文传递一种简易的凤鲚染色体制备的方法

专利名称：	一种简易的凤鲚染色体制备的方法
摘要：	本发明涉及一种简易的凤鲚染色体制备的方法，属于细胞遗传学领域，所述方法包括：1)凤鲚取材装置及操作；2)样品低渗、固定和解离；3)滴片装置及操作；4)染色；本发明制备凤鲚中期分裂相染色体的方法简单快捷，整个流程仅需2～3小时，装置可灵活组装，且易操作，可随时随地开展，尤其适合养殖场、海边基地等不具备实验室条件的场合，制备的染色体制片干净明晰。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	中国水产科学研究院黄海水产研究所
发明人：	周丽青;赵峰;杨爱国;刘志鸿;吴彪;宋超;孙秀俊
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910255168.X
公开号：	CN109883797A
代理机构：	北京科家知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	彭友谊
分类号：	G01N1/31(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	266071 山东省青岛市市南区南京路106号
主权项：	1.一种简易的凤鲚染色体制备的方法，其特征在于所述方法包括：1)凤鲚取材装置及操作；2)样品低渗、固定和解离；3)滴片装置及操作；4)染色；所述的凤鲚取材装置：所述凤鲚取材装置包括一个带盖泡沫箱，泡沫箱内容积至少5L，泡沫箱壁厚度2cm～8cm，箱内空间分隔成2部分，一部分为储物区，放置取材器具，另一部分为冷冻区，放置冰袋或冰瓶，该区放置一瓶20～100ml秋水仙素母液、一个空的100～250ml固定液瓶、一个10～50ml解离液瓶，1个10ml离心管架；箱中所有试剂瓶都坐进相近大小的样品袋中，样品袋中放置1～2个2ml或3ml带刻度的一次性滴管；凤鲚取材操作为捕捞出凤鲚后，迅速挑选性腺饱满、仍有活力、体长12～16cm的成鱼，用镊子揭开鳃盖，剪取部分鳃丝，立刻投入提前配制好的0.04％秋水仙素溶液中，所述0.04％秋水仙素溶液含体积比50％当地过滤海水，所述秋水仙素溶液放置在10ml离心管中，所述10ml离心管放置10ml试管架上，并放置在泡沫箱盖上30min；此时，将储物区的工具从泡沫箱中取出，放置在泡沫箱盖上，泡沫箱盖盖在泡沫箱上；秋水仙素处理期间，测量并记录已被取样的凤鲚体长，解剖性腺或挤压腹部，观察生殖液状态以鉴别凤鲚性别；所述的样品低渗、固定和解离：固定和解离的操作在凤鲚取材装置的冷冻区进行；秋水仙素处理组织样品之后，将样品置于低渗溶液中，低渗处理45～60min；期间上下颠倒离心管数次，确保低渗充分；低渗期间配置固定液和解离液放入泡沫箱的冷冻区冷藏；所述固定液为无水乙醇或甲醇与冰醋酸的体积比为3：1的混合液；所述解离液为冰醋酸与蒸馏水体积比1：1的混合液；将10ml离心管架和1.5ml离心管架放到冷冻区预冷；组织样品低渗结束后，弃去低渗溶液，加入固定溶液，固定15min，固定的样品管插入冷冻区试管架上，盖上泡沫箱盖，确保整个固定过程都在冷冻区进行；固定液量需完全浸没组织；15min之后，弃去固定液，然后更换新的预冷的固定液，再次固定15min，固定的样品管依旧插入冷冻区试管架上，盖上泡沫箱盖，重复此固定步骤3～4次，样品固定充分；将组织样品放入1.5ml预冷的离心管中，离心管中加有0.5～1.5ml预冷的解离液，然后放入冷冻区或4℃冰箱中解离；所述滴片装置及操作：滴片装置包括25～40cm直尺1把、一次性滴管1小包、电炉或电磁炉一个、15～25cm×30～50cm的受热板一块、压直尺和架设受热板的包括砖块或石块在内的重物数块或可容纳电炉或电磁炉的铁框架1个；操作：首先找一个离地1～1.5m高的台面，将直尺的一端用重物压住或固定在台面上，另一端悬空伸出台面，直尺伸出端的正下方为电炉或电磁炉的中心，在电磁炉或电炉正上方架置好受热板，受热板在炉子上方2～10cm处，使受热板受热均匀而不至于碎裂，打开加热装置至受热板温度合适时即可进行热滴片，无电源时进行冷滴片；所述的染色体制片的染色：配置成10％吉姆萨染液，把晾干的滴片平放用一次性滴管吸取1～1.5ml染液轻轻滴在滴有样品的载玻片上，并用吸管依靠液体表面张力拉动液滴顶部使其铺满载玻片，保证样品全被染液覆盖，染色30min之后，弃去染液，细流清洗载玻片上残留的染液5～10s，载玻片45～85°角样品面朝上放置，底部垫上卫生纸吸水，制片晾干后用于显微镜观察镜检及拍照。 2.根据权利要求1所述的一种简易的凤鲚染色体制备的方法，其特征在于所述的取材器具为剪刀、镊子、解剖刀、10ml离心管、1.5ml离心管、1个1.5ml离心管架、1个10ml离心管架、500ml分析纯冰醋酸1瓶、500ml分析纯无水乙醇或甲醇1瓶、一个蒸馏水或超纯水洗瓶、250-500ml 0.075M KCl溶液1瓶、一个染色液试剂盒，所述染色液试剂盒包括10-50ml染色液母液、100-500ml PBS磷酸缓冲液、1个带量程刻度的50ml平底离心管及2ml或3ml带刻度一次性吸管，所述的取材器具中还包括50ml带刻度的平底离心管3个、一盒洗净的染色体制备专用的载玻片、一个多道计时器、1包橡皮筋及其他小物件。 3.根据权利要求1所述的一种简易的凤鲚染色体制备的方法，其特征在于为保持泡沫箱盖的清洁，每次使用之前在泡沫箱盖上覆盖一层保鲜袋。 4.根据权利要求1所述的一种简易的凤鲚染色体制备的方法，其特征在于所述的低渗溶液为0.05mol/L KCl，低渗期间上下颠倒离心管数次，确保低渗充分。 5.根据权利要求1所述的一种简易的凤鲚染色体制备的方法，其特征在于在解离过程中，摇晃或震动解离管壁或一次性滴管吹打解离液以加速样品组织细胞的解离。
所属类别：	发明专利