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原文传递均相化学发光微流控芯片及其检测方法

专利名称：	均相化学发光微流控芯片及其检测方法
摘要：	本发明涉及一种均相化学发光微流控芯片及其检测方法。本发明将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来，采用的试剂包括酶标记物、发光标记物、触发辅助剂、触发剂和校准品；酶标记物、发光标记物和触发辅助剂采用囊滴包埋或冷冻干燥技术包埋在微流控芯片中；酶标记物含HRP标记的IL‑6单克隆抗体和磷酸盐缓冲液；发光标记物含9，10‑二氢吖啶标记的IL‑6单克隆抗体和Tris缓冲液；触发辅助剂含发光辅助剂和枸橼酸盐缓冲液；触发剂为Tris‑HCl缓冲液；校准品含IL‑6校准品和磷酸盐缓冲液。该均相化学发光微流控芯片可有效用于检测样本中的抗原或抗体，整个检测过程不需包被、洗涤，使其用于临床快速检测更易实现。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	无锡壹闪生物科技有限公司
发明人：	奚伟红
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910169162.0
公开号：	CN109884305A
代理机构：	北京酷爱智慧知识产权代理有限公司
代理人：	李婷
分类号：	G01N33/58(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	214174 江苏省无锡市惠山经济开发区惠山大道1699号50305室
主权项：	1.一种均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述均相化学发光微流控芯片是将空间邻近化学发光技术和微流控芯片技术结合起来形成的检测系统；其中，所述空间邻近化学发光技术中：当待测样本中抗原与标记有过氧化物酶的抗体和标记有9,10-二氢吖啶的抗体形成复合物时，在空间上相互接近，加入触发剂辅助剂和触发剂，产生闪光型化学发光；所述微流控芯片技术中：将化学发光试剂包埋在微流控芯片中，当待测样本加入时，与包埋在芯片中的试剂完成化学发光发应，发光强度与待测样本中待测物含量正相关。 2.一种均相化学发光微流控芯片，其特征在于，所述均相化学发光微流控芯片采用的试剂包括：酶标记物、发光标记物、触发辅助剂、触发剂和校准品；所述酶标记物、所述发光标记物和所述触发辅助剂是采用囊滴包埋技术或冷冻干燥技术包埋在微流控芯片中；其中，所述酶标记物的原料组分包括过氧化物酶标记的抗体，所述发光标记物的原料组分包括9,10-二氢吖啶标记的抗体。 3.根据权利要求2所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述酶标记物的原料组分还包括0.05M磷酸盐缓冲液；优选地，所述酶标记物的制备方法包括：称取5mg过氧化物酶溶解于1mL蒸馏水中，之后加入0.2mL新配的0.1M过碘酸钠溶液，室温下避光搅拌20min，将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH 4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；加入20μL 0.2M pH 9.5碳酸盐缓冲液，然后立即加入抗体室温避光轻轻搅拌2h，加新配的4mg/mL硼氢化钠液，混匀，于4℃放置2h，将上述液装入透析袋中，对0.15M pH 7.4PBS透析，4℃过夜；取出透析物，加适量甘油后置于-20℃冰箱保存。 4.根据权利要求2所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述发光标记物的原料组分还包括0.05M Tris缓冲液；优选地，所述发光标记物的制备方法包括：将发光底物Acridan用500μL的DMF溶解；吸取溶解的Acridan 41.3μL，加入0.05M硼酸钠缓冲液708.7μL，再加入抗体，翻转混匀4～5次，室温静置30min；将标记反应管置于摇床上，于2～8℃下混合过夜，取出加入适量甘油后置于-20℃冰箱保存。 5.根据权利要求2所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述触发辅助剂的组分包括发光辅助剂和pH 6.0的枸橼酸盐缓冲液；优选地，所述触发辅助剂的制备方法包括：称取枸橼酸1.82g，枸橼酸钠10.45g，加纯水溶解并定容至1000mL，在枸橼酸盐缓冲液中加入发光辅助剂，混匀后分装，置于4℃冰箱保存备用；其中，更优选每瓶装10mL。 6.根据权利要求2所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述触发剂选用0.05M pH 8.0Tris-HCl缓冲液；优选地，所述触发剂的制备方法包括：称取Tris 6.06g、氯化钠9g，加适量纯水溶解，再加入浓HCl 2.1mL混匀；之后加入吐温-20 2mL，混匀后定容至1000mL，分装，置于4℃冰箱保存备用；其中，更优选每瓶装200mL。 7.根据权利要求2～6任一项所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述抗体选用单克隆抗体，优选为IL-6单克隆抗体。 8.根据权利要求7所述的均相化学发光微流控芯片，其特征在于：所述校准品包括IL-6校准品和0.1M校准品稀释液；优选地，所述校准品的制备方法包括：配制校准品稀释液：称取磷酸二氢钾14.1g，NaH2PO4·2H2O 3.0g，加超纯水溶解，Proclin-300 0.5～1mL，混匀后，加超纯水定容至1000mL，得到校准品稀释液，2～8℃储存备用；配制校准品：采用所述校准品稀释液将纯化IL-6校准品稀释至目标浓度，2～8℃储存备用；其中，所述目标浓度包括：0、10pg/mL、50pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL。 9.权利要求1～8任一项所述的均相化学发光微流控芯片在检测人血清或人血浆中IL-6含量中的应用。 10.权利要求1～8任一项所述的均相化学发光微流控芯片在检测人血清或人血浆中IL-6含量时的方法，其特征在于，包括步骤： S1：进样孔中加入25～50μL校准品/样本； S2：校准品/样本、酶标记物、发光标记物分别流入混匀池，于37℃孵育10min； S3：校准品/样本、酶标记物、发光标记物混合物流经触发辅助剂，混合后流入检测区，加入触发剂50～75μL，立即检测，读取信号值； S4：根据校准品的浓度和样本发光值进行logistic四参数拟合，通过样本发光值计算样本浓度。
所属类别：	发明专利