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原文传递一种UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法

专利名称：	一种UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法
摘要：	本发明属于生物分析领域，具体涉及一种液质联用定量检测人血清中替诺福韦浓度的方法。本发明以氘代替诺福韦为内标物，采用Inertsil C8‑3柱以乙腈和甲酸水溶液为混合流动相进行梯度洗脱，氘代内标和待测物具有相同的保留时间、化学性质和基质效应，测定血清中替诺福韦浓度的重现性、准确度均较好。本发明方法可用于评价替诺福韦各剂型的生物等效性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京海纳医药科技股份有限公司
发明人：	高倩倩;潘诗苑;王华娟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910131960.4
公开号：	CN109900819A
代理机构：	南京思拓知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	吕鹏涛
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	210009 江苏省南京市鼓楼区新模范马路5号15层
主权项：	1.一种UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)人血清样品前处理；(2)液相色谱-质谱联用检测；(3)人血清中替诺福韦浓度的测定；其液相色谱条件包括：采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为甲酸水溶液；所述梯度洗脱过程如下：在0-3.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为5:95；在3.5-3.8分钟内，流动相A和流动相B的体积比由5:95匀速渐变至95:5；在3.8-4.8分钟内，流动相A和流动相B的体积比为95:5；在4.8-5.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比由95:5匀速渐变至5:95；在5.1-6.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比为5:95。 2.根据权利要求1所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，色谱条件包括：采用Inertsil C8-3作为色谱柱；优选该色谱柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.0μm；柱温30～45℃，优选35℃；流速0.5～1.5mL/min，优选0.8mL/min；所述流动相B为0.5～1.5％甲酸水溶液；优选为0.8％甲酸水溶液。 3.根据权利要求1所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，在步骤(1)中，人血清样品通过蛋白沉淀法进行前处理；采用替诺福韦-d7作为内标，采用甲醇作为沉淀剂。 4.根据权利要求3所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，包括配制内标溶液：称取替诺福韦-d7对照品，以乙腈与水的体积比为5:95的混合溶液分别配制浓度为1.00mg/ml替诺福韦-d7储备液和200ng/mL的替诺福韦-d7工作液。 5.根据权利要求4所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，在步骤(1)中，人血清样品前处理包括：人血清样品加入内标和沉淀剂，涡旋及离心后取上清液，与复溶液混合，即得待测样品；所述复溶液为乙腈和水的混合溶液，乙腈和水的体积比为5:95。 6.根据权利要求5所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，在步骤(1)中，人血清样品前处理包括：取60μL人血清样品，加入60μL内标工作液和480μL甲醇，涡旋及离心后取上清液经氮气流吹干后加入100μL复溶液混合后，即得待测样品。 7.根据权利要求5或6所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，所述涡旋及离心的条件为：涡旋5min，在4℃条件下以4000rpm/min速度离心10min。 8.根据权利要求1、2或7所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，将待测样品置于自动进样器，进行LC-MS/MS分析，进样体积为5μL，进样器温度为5℃。 9.根据权利要求1所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，质谱条件包括：采用电喷雾离子源，正离子多反应监测扫描，喷雾电压3300V，离子源温度600℃；替诺福韦，[M+H]+，m/z 288.1→176.2，DP值100V，CE值34V，替诺福韦-d7，[M+H]+，m/z295.1→183.2，DP值100V，CE值37V。 10.根据权利要求1所述的UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法，其特征在于，该方法可用于临床药代动力学样本监测。
所属类别：	发明专利