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原文传递一种分析C4植物光合耐旱能力的方法

专利名称：	一种分析C4植物光合耐旱能力的方法
摘要：	本发明公开了一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，解决现有技术中只能分析完整叶片的叶绿素荧光和活性氧组化定位的问题。本发明的一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，通过将暗适应后的C4植物叶片，切片观察叶肉和维管束鞘细胞的叶绿素荧光并测定荧光参数；或/和将NBT和DAB染色完成的C4植物叶片，切片观察叶肉和维管束鞘细胞的O2·‑和H2O2组织化学定位。本发明设计科学，方法简单，操作简便。本发明以细胞为单位分析，对于研究C4植物光合机构对逆境的响应具有应用意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	四川省农业科学院分析测试中心
发明人：	刘文娟;雷绍荣;郭灵安;宋君;张富丽;常丽娟;王东;尹全
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910215459.6
公开号：	CN109900669A
代理机构：	成都众恒智合专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	陈春华
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	610000 四川省成都市锦江区净居寺路20号
主权项：	1.一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，其特征在于，通过将暗适应后的C4植物叶片，切片观察叶肉和维管束鞘细胞的叶绿素荧光并测定荧光参数；或/和将NBT和DAB染色完成的C4植物叶片，切片观察叶肉和维管束鞘细胞的O2·-和H2O2组织化学定位。 2.根据权利要求1所述的一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，其特征在于，所述切片观察叶肉和维管束鞘细胞的叶绿素荧光并测定荧光参数，具体包括以下步骤：步骤1.材料切片：剪取暗适应后的C4植物叶片中段部分，在叶片上垂直叶脉横切下0.4-0.6mm宽的细丝；步骤2.叶绿素荧光显微观测：将步骤1所得的细丝以横切面放置在载玻片上，保持叶片横切面向上，放置于叶绿素荧光显微成像系统下观测叶绿素荧光，并成像保存结果数据；步骤3.结果分析：在步骤2所得的荧光成像图中，选择3个以上完整的“花环结构”，在每个“花环结构”中的叶肉和维管束鞘细胞区域分别框选，单独分析不同类型细胞的叶绿素荧光参数。 3.根据权利要求2所述的一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，其特征在于，所述观测叶绿素荧光，具体为：选取40×或80×物镜下观测叶绿素荧光，选择慢速动力学模式，蓝光激发，荧光信号在695-770nm检测，测量光密度为100μmol m-2s-1，所述细丝须在3处以上不同位置观测，并成像保存结果数据。 4.根据权利要求2或3所述的一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，其特征在于，所述步骤3中，所述叶绿素荧光参数包括Fv/Fm、ΦPSII、qP、NPQ中的任意一种或几种。 5.根据权利要求1所述的一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，其特征在于，所述将NBT和DAB染色完成的C4植物叶片，切片观察叶肉和维管束鞘细胞的O2·-和H2O2组织化学定位，具体包括以下步骤：步骤A.取C4植物叶片中段部分，利用NBT染色液进行叶片O2·-的组织化学定位染色；步骤B.取C4植物叶片中段部分，利用DAB染色液进行叶片H2O2的组织化学定位染色；步骤C.材料切片：分别取经步骤A、步骤B染色完成的叶片，垂直叶脉横切下约0.4-0.6mm宽的细丝；步骤D.分别将步骤C所得的NBT染色叶片的细丝、DAB染色叶片的细丝以横切面放置在载玻片上，保持叶片横切面向上，放置于光学显微镜40×或80×物镜下观察细胞染色情况。 6.根据权利要求5所述的一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，其特征在于，所述步骤A中，叶片O2·-的组织化学定位染色具体为：将C4植物叶片放于NBT染色液中，真空渗透20-40min后，室温避光反应1-3小时；倒出染色液，加入80％乙醇，沸水浴脱色至叶绿素完全去除，染色完成的叶片保存在50％甘油中。 7.根据权利要求5所述的一种分析C4植物光合耐旱能力的方法，其特征在于，所述步骤B中，叶片H2O2的组织化学定位染色具体为：将C4植物叶片放于DAB染色液中，真空渗透20-40min后，室温避光反应1天，倒出染色液，加入95％乙醇，70℃水浴脱色至叶绿素完全去除，染色完成的叶片保存在50％甘油中。
所属类别：	发明专利