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原文传递一种基于液质联用定量多种肠道菌群有机酸的方法

专利名称：	一种基于液质联用定量多种肠道菌群有机酸的方法
摘要：	本申请公开一种基于液质联用对多种肠道菌群有机酸进行定量的方法，所述方法包括：样品的制备，将所述样品进行预处理，然后用衍生化试剂进行衍生化；空白样品的制备；液质联用检测所述样品和所述空白样品；样品的定量分析。本申请还提供无放射性6个碳13稳定同位素标记3‑硝基苯肼或2‑硝基苯肼作为内标在检测肠道菌群有机酸中的用途。本申请的法基于高灵敏度的三重四级杆质谱仪；无放射性的6个碳13稳定同位素标记13C6‑3NPH衍生化试剂的引入，保证定量的准确性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	清华大学
发明人：	刘晓蕙;王雪颖;许丽娜;王昱松;焦玉佩
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910264304.1
公开号：	CN109917040A
代理机构：	北京安信方达知识产权代理有限公司
代理人：	牛利民;张奎燕
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100084 北京市海淀区清华园
主权项：	1.一种基于液质联用定量多种肠道菌群有机酸的方法，所述方法包括：样品的制备，将所述样品进行预处理，然后用衍生化试剂进行衍生化；空白样品的制备；液质联用检测所述样品和所述空白样品；样品的定量分析。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述衍生化试剂为3-硝基苯肼或2-硝基苯肼。 3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样品为新鲜肠道内容物、粪便、组织或血液。 4.根据权利要求1所述的方法，其中，样品的提取包括：用乙腈、甲醇或乙醇提取样品。 5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述衍生化包括：将所述样品和乙腈的混合物离心，取上清液加入衍生化试剂、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和吡啶溶液，在25℃-60℃下反应15min-30min，氮气保护下吹干备用。 6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述空白样品的制备包括：将乙腈、衍生化试剂、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和吡啶溶液，在25℃-60℃下反应15min-30min，氮气保护下吹干备用。 7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述定量分析包括添加内标物，所述内标物用无放射性6个碳13稳定同位素标记硝基苯肼，然后再进行衍生化。 8.根据权利要求1所述的方法，其中，在液质联用检测中，液相色谱条件：色谱柱：反相色谱柱；色谱柱温：35℃-55℃；进样量1μL-10μL；流速：0.2mL/min-0.3mL/min；流动相组成：A相为水，B相为乙腈；洗脱梯度：0-1min，体积比2％B，1-34min，体积比2％-98％B，34-40min，体积比98％B，40-45min，体积比2％B，质谱条件：利用三重四级杆质谱仪的选择反应监测模式进行检测，电喷雾电离，负离子模式扫描，喷雾电压：3000V；离子传输管温度：320℃；辅助气温度：300℃；鞘气流速：35arb；辅助气体流速：10arb；质量分析器Q1和质量分析器Q2的分辨率：0.7FWHM；碰撞气体的压力为1.5mTorr。 9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法同时定量20-60种肠道菌群有机酸。 10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述方法同时定量42种肠道菌群有机酸，所述有机酸包括：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸、庚酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、十五烷酸、十六烷酸、十六碳一烯酸、十七烷酸、十八烷酸、十八碳一烯酸、十八碳二烯酸、十八碳三烯酸、十九烷酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十四烷酸、二十四碳一烯酸、乙酰乙酸、β-羟丁酸、柠檬酸、乌头酸、异柠檬酸、α-酮戊二酸、延胡索酸、琥珀酸、苹果酸、草酰乙酸、丙酮酸、乳酸中的任一种或更多种。 11.根据权利要求1所述的方法，其中，样品的定量分析包括：提取样品中的色谱峰和保留时间，与衍生化后的标准品出峰时间对比来进行定性分析，并对所检测的化合物进行色谱峰的积分；以所述衍生化后的标准品的特征离子峰的峰面积与相对应的内标峰面积的比值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制内标法的标准曲线；将所述样品中的各个化合物的峰面积比值先扣除空白反应，再带入所述标准曲线，得到所述样品中有机酸的含量。 12.无放射性6个碳13稳定同位素标记3-硝基苯肼或2-硝基苯肼作为内标在分析化学，优选地在检测肠道菌群有机酸中的用途。
所属类别：	发明专利