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原文传递酱油和醋中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇同时检测的方法

专利名称：	酱油和醋中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇同时检测的方法
摘要：	本发明公开了酱油和醋中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇同时检测的方法，样品经前处理后，将脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱和玉米赤霉烯酮免疫亲和柱串联，进行洗脱，一次性完成两种真菌毒素的净化，然后采用液相色谱中串联紫外检测器和荧光检测器进行一次性同时检测，色谱条件为梯度洗脱。该方法在保证检测方法的精密度和准确度的前提下，将两种不同真菌毒素的检测方法合二为一，对样品中的两种真菌毒素通过一次样品的前处理，一次液相色谱进样，完成在两种不同检测器上，不同色谱条件的真菌毒素的同时测定，节约了各种经济成本和时间成本。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山西;14
申请人：	忻州师范学院
发明人：	赵丽娟;程隆;张洪;申剑;刘晓青;焦宏;赵智勇;刘文静;武宇芳;牛志丹
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910245463.7
公开号：	CN109932447A
代理机构：	太原高欣科创专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	崔雪花;冷锦超
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	034099 山西省忻州市七一北路和平西街10号
主权项：	1.酱油和醋中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇同时检测的方法，其特征在于，样品经前处理后，将脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱和玉米赤霉烯酮免疫亲和柱串联，进行洗脱，一次性完成两种真菌毒素的净化，然后采用液相色谱中串联紫外检测器和荧光检测器进行一次性同时检测，色谱条件为梯度洗脱。 2.根据权利要求1所述的酱油和醋中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇同时检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：第1步，样品前处理： 1.1 PBS磷酸缓冲液配置：称取4.0g氯化钠、0.6g磷酸氢二钠、0.1g磷酸二氢钾、0.1g氯化钾，用水将上述试剂溶解，用稀盐酸调节pH至7.0，再用水定容至500mL； 1.2分别准确称取相同的两份25.0g的试样A和B，A试样加入5.0g氯化钠，加入提取液定容至100mL；B试样加入5.0g聚乙二醇，加水定容至100mL；所述提取液中乙腈：水=80:20；采用匀浆机匀浆，超声波提取后，静置，分层；定量滤纸过滤后，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清； 1.3准确移取A样品10mL通过玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，流速为1～2滴/s；用4-6mL的PBS磷酸缓冲液对免疫亲和柱进行淋洗，流速为1～2滴/s；再用10mL水对免疫亲和柱进行淋洗，流速为1～2滴/s，至空气进入小柱中，直至小柱抽干； 1.4准确移取B样品10mL通过脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱，流速为1～2滴/s；用5mL的PBS磷酸缓冲液对免疫亲和柱进行淋洗，流速为1～2滴/s；再用10mL的水对免疫亲和柱进行淋洗，流速为1～2滴/s，至空气进入小柱中，直至小柱抽干； 1.5将抽干后的脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱和玉米赤霉烯酮免疫亲和柱串联，两柱连接处进行粘连密封；加入1mL甲醇进行洗脱，将洗脱液收集至进样小瓶中，待进样；第2步，液相色谱检测： 2.1将液相色谱仪的紫外检测器和荧光检测器串联； 2.2设置液相色谱条件：流动相为水和乙腈，梯度条件为流速1mL/min，初始浓度，水：乙腈=80:20； 3min时，水：乙腈=40:60； 12min时，水：乙腈40:60； 12.1min时，水：乙腈80:20； 19min时，水：乙腈80:20；柱温40℃，色谱柱：Merck Lichrospher PAH 液相色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；通道A：荧光检测器激发波长274nm，发射波长440nm，检测玉米赤霉烯酮；通道B：紫外检测器检测波长218nm，检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇； 2.3进样，样品进样体积：50μL；检测，得到试样中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量。 3.根据权利要求2所述的酱油和醋中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇同时检测的方法，其特征在于，所述匀浆过程中，匀浆机转速3000-3500r/min，匀浆时间3min。 4.根据权利要求2所述的酱油和醋中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇同时检测的方法，其特征在于，所述超声波提取时间为3min。 5.根据权利要求2所述的酱油和醋中玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇同时检测的方法，其特征在于，所有样品和试剂的称量精确到小数点后一位。
所属类别：	发明专利