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原文传递一种梅毒螺旋体抗体检测卡、试剂盒及检测方法

专利名称：	一种梅毒螺旋体抗体检测卡、试剂盒及检测方法
摘要：	本发明属于生物检测技术领域，特别涉及一种梅毒螺旋体抗体检测卡、试剂盒及检测方法，包括检测试纸和塑料外壳，检测试纸包括底板，底板上从左到右依次铺设有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，硝酸纤维素膜上左到右依次设置有检测带和对照带，样品垫由样品垫处理液浸泡玻璃纤维膜并干燥形成，结合垫由混合免疫金溶液喷射在玻璃纤维膜上形成，检测带由包被液稀释的梅毒螺旋体重组抗原喷射在硝酸纤维素膜上形成，对照带由包被液稀释的抗鸡IgY抗体喷射在硝酸纤维素膜上形成。本发明的检测卡应用便捷，结果准确，为下一步准确治疗梅毒提供了依据，适于大规模推广应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南省人民医院
发明人：	杨喆;王悦;李永杰;牟婧祎
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910195212.2
公开号：	CN109932508A
代理机构：	西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	俞晓明
分类号：	G01N33/571(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	450003 河南省郑州市金水区纬五路7号
主权项：	1.一种梅毒螺旋体抗体检测卡，其特征在于，包括检测试纸和包裹在所述检测试纸外周的塑料外壳(1)，所述检测试纸包括底板(2)，所述底板(2)上从左到右依次铺设有样品垫(3)、结合垫(4)、硝酸纤维素膜(5)和吸水纸(6)，且所述样品垫(3)、所述结合垫(4)、所述硝酸纤维素膜(5)和所述吸水纸(6)的端部之间依次固定连接，所述硝酸纤维素膜(5)上左到右依次设置有检测带(7)和对照带(8)，所述塑料外壳(1)上开设有加样口(11)和观察窗(12)，所述加样口(11)与所述样品垫(3)位置相对应，所述观察窗(12)与所述检测带(7)位置相对应，所述观察窗(12)与所述对照带(8)位置相对应；所述样品垫(3)由样品垫处理液浸泡玻璃纤维膜并干燥形成，所述结合垫(4)由混合免疫金溶液喷射在玻璃纤维膜上形成，所述检测带(7)由包被液稀释的梅毒螺旋体重组抗原喷射在所述硝酸纤维素膜(5)上形成，所述对照带(8)由包被液稀释的抗鸡IgY抗体喷射在所述硝酸纤维素膜(5)上形成。 2.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡，其特征在于，所述样品垫(3)靠近所述结合垫(4)的一端、所述结合垫(4)的两端、所述硝酸纤维素膜(5)的两端和所述吸水纸(6)靠近所述硝酸纤维素膜(5)的一端均为直角形，所述样品垫(3)、所述结合垫(4)、所述硝酸纤维素膜(5)和所述吸水纸(6)的直角端依次配合固定连接。 3.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡，其特征在于，所述样品垫处理液是由以下方法制备得到：酪蛋白钠以0.3g/100mL、表面活性剂S6以0.3mL/100mL的比例依次溶于pH8.5、0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中。 4.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡，其特征在于，所述混合免疫金溶液由以下方法制备得到： S1，胶体金中加入硼砂调节pH至7.0，然后加入1mg/ml的梅毒螺旋体重组抗原，静置30min，加入体积分数10％牛血清白蛋白溶液，混匀静置30min，8000g、4℃下离心并保留沉淀，沉淀用重悬液重悬得梅毒螺旋体重组抗原免疫金； S2，胶体金中加入碳酸钾调节pH至7.0，然后加入1mg/ml的鸡IgY抗原，静置30min，加入体积分数10％牛血清白蛋白溶液，混匀静置30min，8000g、4℃下离心并保留沉淀，沉淀用重悬液重悬得鸡IgY抗原免疫金；其中，S1、S2中均用重悬液重悬至离心前溶液体积的1/3； S3，S1中梅毒螺旋体重组抗原免疫金与S2中鸡IgY抗原免疫金以体积比1:1混合，得混合免疫金。 5.如权利要求4所述的梅毒螺旋体抗体检测卡，其特征在于，S1中胶体金、梅毒螺旋体重组抗原、体积分数10％牛血清白蛋白溶液的用量比为100mL:1mL:10mL；S2中胶体金、鸡IgY抗原、体积分数10％牛血清白蛋白溶液的用量比为100mL:1mL:10mL。 6.如权利要求4所述的梅毒螺旋体抗体检测卡，其特征在于，重悬液由以下方法制备得到：海藻糖以2g/100mL、表面活性剂S7以0.3mL/100mL、蔗糖以2g/100mL、曲拉通-100以0.2mL/100mL、PVA以0.2g/100mL的比例依次溶于pH8.5的0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中。 7.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡，其特征在于，所述包被液由以下方法制备得到：海藻糖、甲醇溶和pH7-8的0.01mol/L磷酸盐缓冲液以用量比1g:3mL:50mL混合。 8.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡，其特征在于，包被液中梅毒螺旋体重组抗原浓度为1.5mg/mL；包被液中抗鸡IgY抗体浓度为1.0mg/mL。 9.一种包含权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡的试剂盒。 10.一种利用权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： C1，准备检测样品，所述检测样品为血清、血浆中的一种； C2，将C1中检测样品20μL滴加在所述样品垫(3)上，再滴加60-70μL的PBS缓冲液，静置15min，观察所述检测带(7)和所述对照带(8)显色情况； C3，若所述检测带(7)和所述对照带(8)均显色，则检测样品中含有梅毒螺旋体抗体；若所述检测带(7)不显色而所述对照带(8)显色，则检测样品中不含有梅毒螺旋体抗体；若所述对照带(8)不显色，结果无效。
所属类别：	发明专利