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原文传递真菌染色液和真菌染色方法

专利名称：	真菌染色液和真菌染色方法
摘要：	本发明涉及真菌染色液和真菌染色方法。所述染色液分为A液和B液；A液为氢氧化钾水溶液，A液中氢氧化钾的浓度为9～15wt％；A液还含有浓度为0.1～0.3wt％的龙胆二糖；B液为苯酚的亚甲蓝溶液，B液中亚甲蓝的浓度为0.1wt％，B液中苯酚的浓度为2～3vol％，B液还含有浓度为0.1～0.3wt％的L‑赖氨酸盐酸盐。本发明的真菌染色液具有在使用时染色液用量少的优点，且染色效果好，在真菌的检测中能十分高效的辨别细小油滴与真菌，提升了医院在相关检验工作中的效率，适合推广。对应的，本发明还提供了使用本发明的真菌染色液对真菌进行染色的方法，以及本发明真菌染色液在真菌直接镜检法鉴别中的应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	三门县人民医院
发明人：	胡传彩;楼琼阳;胡传建
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910296267.2
公开号：	CN109946140A
代理机构：	北京中济纬天专利代理有限公司
代理人：	陈振华
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	317100 浙江省台州市三门县海游街道人民路171号
主权项：	1.真菌染色液，其特征在于：所述染色液分为A液和B液；所述A液为氢氧化钾水溶液，所述A液中氢氧化钾的浓度为9～15wt％；所述A液中还含有浓度为0.1～0.3wt％的龙胆二糖；所述B液为苯酚的亚甲蓝溶液，所述B液中亚甲蓝的浓度为0.1～0.2wt％，所述B液中苯酚的浓度为2～3vol％，所述B液中还含有浓度为0.1～0.3wt％的L-赖氨酸盐酸盐；制备所述真菌染色液的方法，分为以下步骤： 1)、A液制备： ①.用天平称取18～30g化学纯氢氧化钾置于烧杯中，缓慢加入去离子水至200ml，轻轻搅拌，使之溶解,制得9～15wt％浓度的氢氧化钾溶液； ②.制备好氢氧化钾溶液后，再加入龙胆二糖0.2～0.6g；待溶液稳定后，转移至塑料试剂瓶中，制得A液； 2)、B液制备： ①.取4～6ml苯酚，加蒸馏水至100ml，用力振摇后置于37℃温箱内1～2天，待完全溶解后至棕色瓶内室温保存，制得4～6vol％浓度的苯酚溶液； ②.称取烘干的亚甲蓝1～2g，加蒸馏水至1000ml，然后加热至35～40℃，搅拌至亚甲蓝完全溶解，冷却至室温； ③.将制备好的苯酚溶液，与亚甲蓝水溶液以体积比1：1混合，制得苯酚浓度为2～3vol％的亚甲蓝溶液； ④.在制得的苯酚浓度为2～3vol％的亚甲蓝溶液中再加入L-赖氨酸盐酸盐0.2～0.6g；待溶液稳定后，转移至塑料试剂瓶中，制得B液。 2.根据权利要求1所述的真菌染色液，其特征在于：所述A液中，氢氧化钾的浓度为10wt％，龙胆二糖的浓度为0.2wt％；所述B液中，亚甲蓝的浓度为0.1wt％，苯酚的浓度为2.5vol％，L-赖氨酸盐酸盐的浓度为0.2wt％。 3.根据权利要求1所述的真菌染色液，其特征在于：所述B液中，亚甲蓝的浓度为0.1wt％，苯酚的浓度为2.5vol％，L-赖氨酸盐酸盐的浓度为0.2wt％。 4.根据权利要求1所述的真菌染色液，其特征在于：所述A液中，氢氧化钾的浓度为15wt％，龙胆二糖的浓度为0.3wt％；所述B液中，亚甲蓝的浓度为0.1wt％，苯酚的浓度为2.5vol％，L-赖氨酸盐酸盐的浓度为0.2wt％。 5.使用权利要求2所述的真菌染色液对阴道分泌物或耳道分泌物中的真菌进行染色的方法，其特征在于，检测样本为阴道分泌物或耳道分泌物，包括以下步骤：步骤1，取样本加0.2～0.3ml生理盐水制成涂片，显微镜下观察清洁度；步骤2，在涂片上对样本滴加A液1～2滴，混匀，混匀时间为5～10S；步骤3，再对样本滴加B液1～2滴，混匀，混匀时间为10～15S，镜下观察。 6.使用权利要求3所述的B液对真菌培养物中的真菌进行染色的方法，其特征在于，检测样本为真菌培养物，包括以下步骤：步骤1：在载玻片上，滴加B液1～2滴；步骤2：用透明胶带粘取部分丝状真菌；步骤3：将粘取得真菌直接贴在载玻片的B液上，1min后在显微镜下观察。 7.使用权利要求4所述的真菌染色液对甲屑或皮屑中的真菌进行染色的方法，其特征在于，检测样本为甲屑或皮屑，包括以下步骤：步骤1：用小镊子取甲屑或皮屑少许或病发一根，置于载玻片中央，滴加A液1～2滴，稍待片刻；步骤2：将载玻片放在火焰上方微加热，使组织或角质溶解；步骤3：冷却后，滴加1～2滴B液，盖上盖玻片并压紧，待组织溶解分散并透明后镜下观察。 8.根据权利要求7所述的对甲屑或皮屑中的真菌进行染色的方法，其特征在于：所述步骤1中，滴加A液的量为2滴，所述步骤3中，滴加B液的量为1滴。 9.权利要求1所述的真菌染色液在真菌直接镜检法鉴别中的应用。
所属类别：	发明专利