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荧光染料DAPI对细胞DNA进行染色定量的癌症筛查和诊断方法
| 专利名称： | 荧光染料DAPI对细胞DNA进行染色定量的癌症筛查和诊断方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种荧光染料DAPI对细胞DNA进行染色定量的癌症筛查和诊断方法。它以DAPI为染料对细胞涂片或细胞、组织切片中的细胞核染色，在荧光显微镜下拍照，根据各细胞核的荧光强弱对各细胞核中的DNA进行相对定量。DNA含量异常(非整数倍体或倍体数大于4.5以上)的细胞为疑似癌细胞。疑似癌细胞的数量和形态可用用于癌症筛查和诊断。本发明提供的染色方法具有染色时间快，操作简单，定量准确的优点；且用途广泛，能对细胞凃片、组织切片和培养细胞中细胞的DNA进行定量，可用于癌症样本筛查。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 湖南;43 |
| 申请人： | 贺权源 |
| 发明人： | 贺权源;周明青 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-03-26T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-06-28T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910236523.9 |
| 公开号： | CN109946278A |
| 代理机构： | 长沙市和协专利代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 熊晓妹 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 410000 湖南省长沙市岳麓区金星中路383号永祺西京11栋2204房 |
| 主权项： | 1.一种荧光染料DAPI对细胞DNA进行染色定量在癌症筛查和诊断的用途。 2.一种荧光染料DAPI对细胞DNA进行染色定量在癌症筛查和诊断的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，细胞样本的获取； 步骤2，取浓度0.05ug/ml-5ug/ml DAPI工作液与细胞样本，充分混合，染色2-5min； 步骤3，清水洗涤20s，PBS洗涤30s×3次； 步骤4，95％、100％乙醇脱水各1min； 步骤5，待干，封片； 步骤6，在荧光显微镜下镜检查，通过图片分析软件对细胞DNA进行定量分析； 步骤7，依据DNA定量信息，鉴定DNA含量异常，包括非整数倍体细胞或是倍体数大于4.5以上的细胞，根据异常细胞的数量作出癌症筛查和诊断结论； 所述的步骤2之前或之后还包括制片步骤，当细胞样本为切片时，制片步骤在步骤2之前进行。 3.根据权利要求2所述的定量测量的方法，其特征在于，所述细胞样本获取具体为：取细胞置于固定液中，振荡细胞样本1min，使其悬浮；取细胞沉降仓法制片；取滤网，加2.5ml细胞分离液，盖滤网。 4.根据权利要求2所述的定量测量的方法，其特征在于，所述细胞样本获取包括：取细胞石蜡切片使用恒温水浴锅，温度控制在37-40℃左右，利于石蜡切片的展开，贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋白质凝固后即可染色；干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95％、85％、70％进行水化。 5.根据权利要求2所述的定量测量的方法，其特征在于，所述细胞样本获取包括：取冰冻切片室温晾干15min，干燥后的切片置于二甲苯中进行透明化处理，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95％、85％、70％进行水化。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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