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原文传递一种壬基酚半抗原和抗原及其制备方法和用途

专利名称：	一种壬基酚半抗原和抗原及其制备方法和用途
摘要：	本发明公开了一种内分泌干扰物壬基酚半抗原和抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的壬基酚人工抗原为将式I所示的壬基酚半抗原与载体蛋白偶联所得的抗原。本发明所提供壬基酚人工抗原合成方法简单，纯度高和产率高，对于壬基酚抗体的制备，以及食品中壬基酚残留检测具有重大价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京维德维康生物技术有限公司
发明人：	马立才;杨柳;秦誉;邵兵;丁亚芳;聂靖东;段莉莉;姚凯;李淑芳;王照鹏;刘薇
专利状态：	有效
申请日期：	2017-12-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201711400990.8
公开号：	CN109959785A
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100095 北京市海淀区北清路156号环保示范园9号院3号楼
主权项：	1.一种壬基酚半抗原，其结构为式I所示化合物：式I。 2.制备权利要求1所述化合物的方法，包括步骤为：在壬基酚中加入DMF、NaH，所述壬基酚、DMF、NaH的配比为1000mg：30ml：50mg，室温反应15 min获得反应液；在反应液中加入200mg 4-溴丁酸乙酯，40℃油浴条件下反应，25ml乙酸乙酯萃取，蒸干，加入12mL乙酸乙酯将残留物溶解，称量2倍重量的硅胶加入其中，旋蒸干，准备硅胶柱上样；将混合好的硅胶样品使用干样加样法进行加样，用石油醚：乙酸乙酯体系淋洗，收集淋洗液，收集旋蒸产物；产物用7 mL甲醇溶解，按2倍物质的量加入2 M NaOH溶液，40℃下加热，水解完全后，用6M的HCl调节pH到2；将反应液用50mL乙酸乙酯萃取，收集有机相，加入无水硫酸钠；过滤，旋蒸干，得到式I所述化合物。 3.壬基酚抗原，为将权利要求1所述化合物与载体蛋白偶联所得的抗原。 4.根据权利要求3所述的壬基酚抗原，其特征在于：所述载体蛋白可以是牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白或兔血清蛋白。 5.权利要求3或4所述的壬基酚抗原的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述化合物与载体蛋白通过酰胺键偶联，获得所述壬基酚抗原；权利要求1所述化合物与所述载体蛋白偶联的摩尔比为9.4：1。 6.根据权利要求5所述的壬基酚抗原的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）将所述壬基酚半抗原溶解于DMF中，然后加入EDC和NHS，20-25℃磁力搅拌反应2-3h，得到溶液I；其中，所述壬基酚半抗原、所述DMF、所述EDC、所述NHS的配比为20mg：1.5mL：21.5mg：13mg；（2）将所述载体蛋白置于0.1M碳酸氢钠缓冲液中，200rpm搅拌10min，充分溶解，得到溶液II；所述载体蛋白与所述0.1M碳酸氢钠缓冲液的配比为33.6-50mg：3.5mL；（3）将所述溶液I和所述溶液II混合，具体为在0-4℃条件下，1000rpm搅拌下，将溶液I逐滴加入到所述溶液II中，500rpm搅拌反应24h，得到溶液III；（4）用0.01M PBS，pH7.2磷酸盐缓冲液，于4℃对所述溶液III搅拌透析3天，得到所述壬基酚抗原。 7.权利要求1所述化合物或权利要求3所述壬基酚抗原的应用，其特征在于定性或定量检测壬基酚；制备壬基酚抗体。 8.利用权利要求3所述壬基酚抗原制备的抗体。 9.根据权利要求7所述的壬基酚抗原的应用，其特征在于可以为制备酶联免疫试剂盒、胶体金检测卡和免疫亲和柱。 10.根据权利要求7所述的壬基酚抗原的应用，其特征在于检测样本可以为鸡蛋、牛奶和肉类，所述检测上述样本中壬基酚的检测限为1μg/kg，灵敏度为0.1μg/kg。
所属类别：	发明专利