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原文传递用于细胞治疗法和其他免疫治疗法的多重分析的系统和方法

专利名称：	用于细胞治疗法和其他免疫治疗法的多重分析的系统和方法
摘要：	本发明公开了鉴定当受试细胞接触靶细胞(例如，受试免疫细胞接触靶癌细胞)或刺激试剂时来自在异质细胞群体内的受试细胞的分泌物质组(secretome)的方法，以及使用鉴定出的分泌物质组来鉴定对于细胞疗法(包括过继性CAR T‑细胞疗法)来说安全且有效的细胞的方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	美国;US
申请人：	伊索普莱克西斯公司
发明人：	S·麦凯;C·恩格;E·贝蒂尼
专利状态：	有效
申请日期：	2017-09-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201780069270.X
公开号：	CN109964126A
代理机构：	中国国际贸易促进委员会专利商标事务所
代理人：	傅宇昌
分类号：	G01N33/50(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	美国康涅狄格
主权项：	1.鉴定来自在异质细胞群体内的受试细胞的分泌物质组的方法，其包括： (a)使所述受试细胞与靶细胞或刺激试剂在多个腔室中的至少一个腔室之中相接触，其中所述腔室与抗体组处于流体联通并且所述抗体组可移除地附着至所述腔室； (b)在足以允许下列情况的条件下，在所述腔室中维持所述受试细胞和所述靶细胞或所述刺激试剂： (1)所述受试细胞分泌肽、多肽和蛋白质中的至少一种，和 (2)对于所述至少一种蛋白质来说特异性的抗体组中的至少一种抗体结合所述至少一种肽、多肽或蛋白质，从而形成抗体:分泌型肽、抗体:分泌型多肽或抗体:分泌型蛋白质复合物中的至少一种； (c)从所述腔室中移除所述抗体组；和 (d)对所述至少一种肽、多肽或蛋白质进行成像，从而形成抗体:分泌型肽、抗体:分泌型多肽或抗体:分泌型蛋白质复合物中的至少一种，由此鉴定出当所述受试细胞接触所述靶细胞或所述刺激试剂时所述受试细胞的分泌物质组。 2.鉴定来自在异质细胞群体内的受试细胞的分泌物质组的方法，其包括： (a)使所述受试细胞与靶细胞或刺激试剂在足以允许对所述受试细胞进行刺激的条件下相接触； (b)将所述受试细胞引入至多个腔室中的至少一个腔室，其中所述腔室与抗体组处于流体联通并且所述抗体组可移除地附着至所述腔室； (c)在足以允许下列情况的条件下，在所述腔室中维持所述受试细胞： (1)所述受试细胞分泌肽、多肽和蛋白质中的至少一种，和 (2)对于所述至少一种蛋白质来说特异性的抗体组中的至少一种抗体结合所述至少一种肽、多肽或蛋白质，从而形成抗体:分泌型肽、抗体:分泌型多肽或抗体:分泌型蛋白质复合物中的至少一种； (d)从所述腔室中移除所述抗体组；和 (e)对所述至少一种肽、多肽或蛋白质进行成像，从而形成抗体:分泌型肽、抗体:分泌型多肽或抗体:分泌型蛋白质复合物中的至少一种，由此鉴定出在与所述靶细胞或所述刺激试剂相接触后所述受试细胞的分泌物质组。 3.权利要求2的方法，其进一步包括破坏所述受试细胞与所述靶细胞或所述刺激试剂之间的接触的步骤。 4.权利要求2的方法，其中所述受试细胞和所述靶细胞被组合物所包含，并且其中所述受试细胞与所述靶细胞或所述刺激试剂处于流体联通。 5.权利要求4的方法，其进一步包括从所述组合物中耗竭所述靶细胞或所述刺激试剂的步骤。 6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述异质细胞群体为在功能上异质的细胞群体。 7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述在功能上异质的细胞群体包含至少两种响应于刺激而产生分泌物质组的细胞，其中第一种细胞产生第一分泌物质组，其中第二种细胞产生第二分泌物质组，并且其中所述第一分泌物质组和所述第二分泌物质组不是相同的。 8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述在功能上异质的细胞群体包含一种或多种免疫细胞。 9.权利要求8的方法，其中所述一种或多种免疫细胞包括T-淋巴细胞、B-淋巴细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞。 10.权利要求9的方法，其中所述T-淋巴细胞包括幼稚T-淋巴细胞、激活的T-淋巴细胞、效应T-淋巴细胞、辅助T-淋巴细胞、细胞毒性T-淋巴细胞、γδT-淋巴细胞、调节T-淋巴细胞、记忆T-淋巴细胞或记忆干T-淋巴细胞。 11.权利要求9或10的方法，其中所述T-淋巴细胞表达非天然出现的抗原受体。 12.权利要求7的方法，其中所述T-淋巴细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。 13.权利要求9的方法，其中所述B-淋巴细胞包括成浆细胞、浆细胞、记忆B-淋巴细胞、调节B细胞、滤泡B细胞或边缘区B细胞。 14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述受试细胞为免疫细胞。 15.权利要求14的方法，其中所述免疫细胞为T-淋巴细胞、B-淋巴细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞。 16.权利要求15的方法，其中所述T-淋巴细胞为幼稚T-淋巴细胞、激活的T-淋巴细胞、效应T-淋巴细胞、辅助T-淋巴细胞、细胞毒性T-淋巴细胞、γδT-淋巴细胞、调节T-淋巴细胞、记忆T-淋巴细胞或记忆干T-淋巴细胞。 17.权利要求15或16的方法，其中所述T-淋巴细胞表达非天然出现的抗原受体。 18.权利要求17的方法，其中所述T-淋巴细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。 19.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述在功能上异质的细胞群体包含一种或多种神经元细胞。 20.权利要求19的方法，其中所述一种或多种神经元细胞包括神经元、神经胶质细胞、星形胶质细胞、卫星细胞或肠神经胶质细胞。 21.权利要求1-7或19-20中任一项的方法，其中所述受试细胞为神经元细胞。 22.权利要求21的方法，其中所述神经元细胞为神经元、神经胶质细胞、星形胶质细胞、卫星细胞或肠神经胶质细胞。 23.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述在功能上异质的细胞群体包含一种或多种内分泌细胞。 24.权利要求23的方法，其中所述一种或多种内分泌细胞分离自或源自松果腺、脑垂体腺、胰腺、卵巢、睾丸、甲状腺、甲状旁腺、下丘脑或肾上腺。 25.权利要求1-7或23-24中任一项的方法，其中所述受试细胞为内分泌细胞。 26.权利要求25的方法，其中所述内分泌细胞分离自或源自松果腺、脑垂体腺、胰腺、卵巢、睾丸、甲状腺、甲状旁腺、下丘脑或肾上腺。 27.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述在功能上异质的细胞群体包含一种或多种外分泌细胞。 28.权利要求27的方法，其中所述一种或多种外分泌细胞分离自或源自唾液腺、汗腺或胃肠道组成部分。 29.权利要求28的方法，其中所述胃肠道组成部分包括口、胃、小肠和大肠。 30.权利要求1-7或28-29中任一项的方法，其中所述受试细胞为外分泌细胞。 31.权利要求30的方法，其中所述外分泌细胞分离自或源自唾液腺、汗腺或胃肠道组成部分。 32.权利要求31的方法，其中所述胃肠道组成部分包括口、胃、小肠和大肠。 33.权利要求1或6-32中任一项的方法，其中使所述受试细胞与所述靶细胞或所述刺激试剂在腔室中相接触的步骤包括所述受试细胞与所述靶细胞的直接接触。 34.权利要求1或6-32中任一项的方法，其中使所述受试细胞与所述靶细胞或所述刺激试剂在腔室中相接触的步骤包括所述受试细胞与所述靶细胞的间接接触。 35.权利要求34的方法，其中所述间接接触包括所述受试细胞与所述靶细胞或所述刺激试剂之间的流体联通。 36.权利要求34的方法，其中所述间接接触包括所述受试细胞与所述靶细胞或所述刺激试剂之间通过天然或人工细胞外基质的联通。 37.权利要求34-36中任一项的方法，其中所述间接接触包括所述受试细胞与所述靶细胞或所述刺激试剂之间通过中间细胞的联通。 38.权利要求1-37中任一项的方法，其中所述靶细胞为癌细胞。 39.权利要求38的方法，其中所述癌细胞为原初癌细胞或经培养的癌细胞。 40.权利要求39的方法，其中所述原初癌细胞是转移性的。 41.权利要求1-37中任一项的方法，其中所述靶细胞为B-淋巴细胞。 42.权利要求1-37中任一项的方法，其中所述靶细胞为细菌、酵母或微生物。 43.权利要求1-37中任一项的方法，其中所述靶细胞为受感染细胞。 44.权利要求43的方法，其中所述受感染细胞接触了病毒、细菌、酵母或微生物。 45.权利要求1-37中任一项的方法，其中所述靶细胞为宿主细胞。 46.权利要求47的方法，其中所述宿主细胞包括任何分离自或源自与所述受试细胞相同的个体的细胞。 47.权利要求45或46的方法，其中所述宿主细胞使自身免疫应答永续存在。 48.权利要求45或46的方法，其中所述宿主细胞为自身免疫应答的靶标。 49.权利要求45或46的方法，其中所述宿主细胞为功能性细胞并且其中所述宿主细胞不刺激自身免疫应答。 50.权利要求1-37中任一项的方法，其中所述刺激试剂包括刺激性抗体。 51.权利要求50的方法，其中所述刺激性抗体为单克隆抗体。 52.权利要求51的方法，其中所述单克隆抗体为完全人抗体。 53.权利要求51的方法，其中所述单克隆抗体为人源化抗体、嵌合抗体、重组抗体或经修饰的抗体。 54.权利要求53的方法，其中所述经修饰的抗体包含一个或多个相比于具有相同表位特异性的抗体的完全人版本而言的序列变异、一个或多个经修饰的或合成的氨基酸或者化学部分，以增强刺激功能。 55.权利要求50-54中任一项的方法，其中所述刺激性抗体特异性地结合T细胞调节蛋白的表位。 56.权利要求55的方法，其中所述T细胞调节蛋白包括程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)。 57.权利要求50-56中任一项的方法，其中所述刺激性抗体包括Nivolumab或其生物相似物。 58.权利要求1-37中任一项的方法，其中所述刺激试剂包括刺激性配体。 59.权利要求58的方法，其中所述刺激性配体包括程序性死亡配体1(PD-L1)。 60.权利要求1-50中任一项的方法，其中所述抗体组中的每一种抗体附着至可移除地附着至所述腔室的表面。 61.权利要求60的方法，其中所述抗体组中的每一种抗体附着至所述表面以形成重复图式，并且其中所述多个腔室中的每个腔室包含所述图式的重复。 62.权利要求1-61中任一项的方法，其中所述足以允许下列情况的条件包括5％CO2和37℃并持续至少2小时的时间段： (1)所述受试细胞分泌肽、多肽和蛋白质中的至少一种，和 (2)对于所述至少一种蛋白质来说特异性的抗体组中的至少一种抗体结合所述至少一种肽、多肽或蛋白质，从而形成抗体:分泌型肽、抗体:分泌型多肽或抗体:分泌型蛋白质复合物中的至少一种。 63.权利要求62的方法，其中所述时间段为至少4小时，至少8小时，至少12小时，至少16小时，或至少24小时。 64.权利要求62的方法，其中所述时间段为至少16小时。 65.权利要求1-64中任一项的方法，其中所述至少一个腔室包含维持来自步骤(a)至(c)的受试细胞的生存力的细胞培养基。 66.权利要求1-65中任一项的方法，其中所述分泌物质组包含一种或多种不同的指示减小或渐减的细胞功能或细胞生存力的肽、多肽或蛋白质。 67.权利要求1-65中任一项的方法，其中所述分泌物质组包含一种或多种不同的指示增大或渐增的炎症的肽、多肽或蛋白质。 68.权利要求1-65中任一项的方法，其中所述分泌物质组包含一种或多种不同的指示增加的细胞活性或细胞刺激的肽、多肽或蛋白质。 69.权利要求1-68中任一项的方法，其进一步包括测定多功能力度指数(PSI)。 70.权利要求69的方法，其中所述多功能力度指数为在所述异质细胞群体内多功能受试细胞的百分比与两种或更多种细胞因子的平均信号强度的乘积。 71.权利要求70的方法，其中所述多功能受试细胞以单细胞水平分泌至少两种细胞因子。 72.权利要求71的方法，其中由所述多功能受试细胞中的每一种所产生的所述至少两种细胞因子和具有所述平均信号强度的所述两种或更多种细胞因子包括相同的细胞因子。 73.权利要求71的方法，其中由所述多功能受试细胞中的每一种所产生的所述至少两种细胞因子和具有所述平均信号强度的所述两种或更多种细胞因子由相同的细胞因子组成。 74.权利要求69-74中任一项的方法，其中所述PSI的增加指示所述多功能受试细胞的效能的增加。 75.通过权利要求1-74中任一项的方法所产生的分泌物质组用于鉴定表达特异性地结合呈现在靶细胞上的抗原的CAR的T-淋巴细胞的用途。 76.通过权利要求1-74中任一项的方法所产生的分泌物质组用于评价细胞疗法的安全性的用途，其中所述细胞疗法包括所述受试细胞，所述细胞疗法旨在对所述靶细胞作出应答，并且其中当所述分泌物质组缺少一种或多种刺激免疫系统的肽、多肽或蛋白质时，所述细胞疗法被认为是安全的。 77.通过权利要求1-74中任一项的方法所产生的分泌物质组用于评价细胞疗法的安全性的用途，其中所述细胞疗法包括所述受试细胞，所述细胞疗法旨在对所述靶细胞作出应答，并且其中当所述分泌物质组缺少一种或多种指示降低的细胞生存力的肽、多肽或蛋白质时，所述细胞疗法被认为是安全的。 78.通过权利要求1-74中任一项的方法所产生的分泌物质组用于评价细胞疗法的功效的用途，其中所述细胞疗法包括所述受试细胞，所述细胞疗法旨在对所述靶细胞作出应答，并且其中当所述分泌物质组包含一种或多种指示对于所述靶细胞的选择性应答的肽、多肽或蛋白质时，所述细胞疗法被认为是安全的。 79.通过权利要求1-74中任一项的方法所产生的分泌物质组用于评价细胞疗法的用途，其中所述细胞疗法包括所述受试细胞，并且其中所述受试细胞为表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞；其中所述细胞疗法旨在对所述靶细胞作出应答，其中所述靶细胞为表达所述嵌合抗原受体(CAR)与之特异性地结合的抗原的癌细胞，并且其中在结合了所述抗原后，所述嵌合抗原受体(CAR)刺激所述T细胞；其中当所述分泌物质组包含一种或多种刺激免疫系统超过第一阈值的肽、多肽或蛋白质时，所述细胞疗法被认为是有效的，其中所述一种或多种肽、多肽或蛋白质包括一种或多种细胞因子，并且其中所述一种或多种细胞因子选自由效应细胞因子、刺激细胞因子或趋化细胞因子组成的组；并且其中当所述分泌物质组包含一种或多种介导有害过程的肽、多肽或蛋白质时，所述细胞疗法被认为是安全的，其中所述一种或多种肽、多肽或蛋白质包括一种或多种细胞因子，并且其中所述一种或多种细胞因子选自由调节细胞因子和炎性细胞因子组成的组。 80.权利要求79的用途，其中所述效应细胞因子选自由粒酶B、IFN-γ、MIP-1α、穿孔蛋白、TNF-α和TNF-β组成的组。 81.权利要求79的用途，其中所述刺激细胞因子选自由GM-CSF、IL-12、IL-15、IL-2、IL-21、IL-5、IL-7、IL-8和IL-9组成的组。 82.权利要求79的用途，其中所述趋化细胞因子选自由CCL-11、IP-10、MIP-1β和RANTES组成的组。 83.权利要求79的用途，其中所述调节细胞因子选自由IL-10、IL-13、IL-22、IL-4、TGF-β1、sCD137和sCD40L组成的组。 84.权利要求79的用途，其中所述炎性细胞因子选自由IL-17A、IL-17F、IL-1β、IL-6、MCP-1和MCP-4组成的组。 85.权利要求79-84中任一项的用途，其中所述有害过程包括炎症。 86.权利要求79-84中任一项的用途，其中所述有害过程包括自身免疫应答。 87.权利要求79-84中任一项的用途，其中所述有害过程包括对所述靶细胞的非选择性应答。 88.将受试细胞群体鉴定为对于在过继性细胞疗法中使用来说是有效的方法，其包括：根据权利要求1-65中任一项的方法来检测所述受试细胞群体的每个受试细胞的分泌物质组的至少一种组分；鉴定出所述受试细胞群体的多功能细胞亚群体，其中所述受试细胞群体的受试细胞的多功能细胞分泌两种或更多种信号传导分子；计算所述受试细胞群体的多功能性百分比，其中所述多功能性百分比为在所述受试细胞群体内的多功能细胞的百分比；测量所述受试细胞群体的每个多功能细胞的分泌物质组的第一信号传导分子的信号强度；测量所述受试细胞群体的每个多功能细胞的分泌物质组的第二信号传导分子的信号强度；计算关于所述受试细胞群体的每个多功能细胞的多功能力度指数(PSI)，其中所述PSI包括(a)所述受试细胞群体的多功能性百分比与所述第一信号传导分子的信号强度的乘积，和(b)所述受试细胞群体的多功能性百分比与所述第二信号传导分子的信号强度的乘积；当出现下述情况时，将所述受试细胞群体鉴定为对于在过继性细胞疗法中使用来说是有效的：所述PSI指示在所述受试细胞群体中至少50％的受试细胞是多功能的，所述第一信号传导分子的信号强度指示在所述腔室内所述第一信号传导分子的浓度在2pg/ml和10,000pg/ml之间，包括端点，并且所述第二信号传导分子的信号强度指示在所述腔室内所述第二信号传导分子的浓度在2pg/ml和10,000pg/ml之间，包括端点；和当出现下述情况时，将所述受试细胞群体鉴定为对于在过继性细胞疗法中使用来说不是有效的：所述PSI指示在所述受试细胞群体中少于50％的受试细胞是多功能的，所述第一信号传导分子的信号强度指示在所述腔室内所述第一信号传导分子的浓度小于2pg/ml，并且所述第二信号传导分子的信号强度指示在所述腔室内所述第二信号传导分子的浓度小于2pg/ml。 89.权利要求88的方法，其中所述受试细胞群体包含多个免疫细胞。 90.权利要求89的方法，其中所述多个免疫细胞包括T-淋巴细胞、B-淋巴细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞或其组合。 91.权利要求90的方法，其中所述T-淋巴细胞为幼稚T-淋巴细胞、激活的T-淋巴细胞、效应T-淋巴细胞、辅助T-淋巴细胞、细胞毒性T-淋巴细胞、γδT-淋巴细胞、调节T-淋巴细胞、记忆T-淋巴细胞或记忆干T-淋巴细胞。 92.权利要求90或91的方法，其中所述T-淋巴细胞表达非天然出现的抗原受体。 93.权利要求92的方法，其中所述T-淋巴细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。 94.权利要求88的方法，其中所述受试细胞群体包含多个神经元细胞。 95.权利要求94的方法，其中所述多个神经元细胞包括神经元、神经胶质细胞、星形胶质细胞、卫星细胞、肠神经胶质细胞或其组合。 96.权利要求88的方法，其中所述受试细胞群体包含多个内分泌细胞。 97.权利要求96的方法，其中所述多个内分泌细胞包括一种或多种分离自或源自松果腺、脑垂体腺、胰腺、卵巢、睾丸、甲状腺、甲状旁腺、下丘脑或肾上腺的细胞。 98.权利要求88的方法，其中所述受试细胞群体包含多个外分泌细胞。 99.权利要求98的方法，其中所述多个外分泌细胞包括一种或多种分离自或源自唾液腺、汗腺或胃肠道组成部分的细胞。 100.权利要求99的方法，其中所述胃肠道组成部分包括口、胃、小肠和大肠。 101.权利要求88-100中任一项的方法，其中所述靶细胞为癌细胞。 102.权利要求88-100中任一项的方法，其中所述靶细胞为B-淋巴细胞。 103.权利要求88-100中任一项的方法，其中所述靶细胞为受感染细胞。 104.权利要求88-100中任一项的方法，其中所述靶细胞为宿主细胞。 105.权利要求104的方法，其中所述宿主细胞使自身免疫应答永续存在。 106.权利要求99-105中任一项的方法，其中所述第一信号传导分子为肽、多肽或蛋白质。 107.权利要求106的方法，其中所述第一信号传导分子为细胞因子。 108.权利要求88-107中任一项的方法，其中所述第二信号传导分子为肽、多肽或蛋白质。 109.权利要求108的方法，其中所述第二信号传导分子为细胞因子。 110.权利要求88-109中任一项的方法，其中所述受试细胞群体包含多个T-淋巴细胞；其中所述靶细胞为癌细胞、受感染细胞或使自身免疫应答永续存在的宿主细胞；所述第一信号传导分子包括效应细胞因子、刺激细胞因子或趋化细胞因子，和所述第二信号传导分子包括效应细胞因子、刺激细胞因子或趋化细胞因子。 111.权利要求110的方法，其中所述多个T-淋巴细胞中的至少一个T-淋巴细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。 112.权利要求111的方法，其中所述多个T-淋巴细胞中的每个T-淋巴细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。 113.权利要求110-112中任一项的方法，其中所述效应细胞因子为粒酶B、IFN-γ、MIP-1α、穿孔蛋白、TNF-α或TNF-β。 114.权利要求110-112中任一项的方法，其中所述刺激细胞因子为GM-CSF、IL-12、IL-15、IL-2、IL-21、IL-5、IL-7、IL-8和IL-9。 115.权利要求110-112中任一项的方法，其中所述趋化细胞因子为CCL-11、IP-10、MIP-1β或RANTES。 116.权利要求88-115中任一项的方法，其进一步包括：当出现下述情况时，将所述受试细胞群体鉴定为对于在过继性细胞疗法中使用来说是安全的：所述PSI指示在所述受试细胞群体中至少50％的受试细胞是多功能的，所述第一信号传导分子的信号强度指示在所述腔室内所述第一信号传导分子的浓度小于2pg/ml，所述第二信号传导分子的信号强度指示在所述腔室内所述第二信号传导分子的浓度小于2pg/ml，所述受试细胞群体包含多个T-淋巴细胞，所述第一信号传导分子包括调节细胞因子或炎性细胞因子，并且所述第二信号传导分子包括调节细胞因子或炎性细胞因子；和当出现下述情况时，将所述受试细胞群体鉴定为对于在过继性细胞疗法中使用来说不是安全的：所述PSI指示在所述受试细胞群体中至少50％的受试细胞是多功能的，所述第一信号传导分子的信号强度指示在所述腔室内所述第一信号传导分子的浓度大于2pg/ml，所述第二信号传导分子的信号强度指示在所述腔室内所述第二信号传导分子的浓度大于2pg/ml，所述受试细胞群体包含多个T-淋巴细胞，所述第一信号传导分子包括调节细胞因子或炎性细胞因子，并且所述第二信号传导分子包括调节细胞因子或炎性细胞因子。 117.权利要求116的方法，其中所述调节细胞因子为IL-10、IL-13、IL-22、IL-4、TGF-β1、sCD137和sCD40L。 118.权利要求116的方法，其中所述炎性细胞因子为IL-17A、IL-17F、IL-1β、IL-6、MCP-1和MCP-4。 119.权利要求116-118中任一项的方法，其中所述多个T-淋巴细胞中的至少一个T-淋巴细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。 120.权利要求119的方法，其中所述多个T-淋巴细胞中的每个T-淋巴细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。 121.权利要求88-120中任一项的方法，其中所述受试细胞群体包含至少100个细胞。 122.权利要求88-120中任一项的方法，其中所述受试细胞群体包含至少500个细胞。 123.权利要求88-120中任一项的方法，其中所述受试细胞群体包含至少1000个细胞。 124.权利要求88-120中任一项的方法，其中所述受试细胞群体包含至少5000个细胞。 125.权利要求88-124中任一项的方法，其中所述检测步骤包括检测来自所述受试细胞群体的每个受试细胞的分泌物质组的至少2种组分。 126.权利要求88-124中任一项的方法，其中所述检测步骤包括检测来自所述受试细胞群体的每个受试细胞的分泌物质组的至少10种组分。 127.权利要求88-124中任一项的方法，其中所述检测步骤包括检测来自所述受试细胞群体的每个受试细胞的分泌物质组的至少20种组分。 128.权利要求88-124中任一项的方法，其中所述检测步骤包括检测来自所述受试细胞群体的每个受试细胞的分泌物质组的至少30种组分。 129.权利要求88-124中任一项的方法，其中所述检测步骤包括检测来自所述受试细胞群体的每个受试细胞的分泌物质组的至少50种组分。 130.权利要求88-124中任一项的方法，其中所述检测步骤包括检测来自所述受试细胞群体的每个受试细胞的分泌物质组的至少100种组分。 131.权利要求88-130中任一项的方法，其中所述多功能细胞的百分比包括分泌两种或更多种信号传导分子的多功能细胞的第一百分比，分泌三种或更多种信号传导分子的多功能细胞的第二百分比，分泌四种或更多种信号传导分子的多功能细胞的第三百分比，分泌五种或更多种信号传导分子的多功能细胞的第四百分比，和分泌种类数目渐增的信号传导分子的多功能细胞的后续百分比。 132.权利要求88-130中任一项的方法，其中所述信号强度的测量包括：检测分别来自特异于所述第一或第二信号传导分子的抗体和所述第一或第二信号传导分子的复合物的荧光信号，和将每个荧光信号对参考信号进行标准化以确定相对荧光单位(RFU)值。 133.权利要求132的方法，其中所述参考信号为最大信号、最小信号或来自具有恒定或已知浓度的分泌物质组的组分的信号。 134.权利要求133的方法，其中所述参考信号为最丰富的受试细胞的分泌物质组的组分。 135.权利要求88-134中任一项的方法，其进一步包括测量每个多功能细胞的分泌物质组的第三或后续信号传导分子。 136.权利要求88-135中任一项的方法，其进一步包括测定所述第一信号传导分子、所述第二信号传导分子或所述后续信号传导分子对于所述多功能细胞亚群体对靶细胞的应答的相对贡献，其中所述相对贡献为来自于来自每个多功能细胞的所述第一信号传导分子、所述第二信号传导分子或所述后续信号传导分子的每个多功能细胞的PSI的百分比的平均值与关于所述多功能细胞亚群体的总PSI的乘积。
所属类别：	发明专利