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原文传递一种检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条及其制备方法

专利名称：	一种检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条及其制备方法
摘要：	本发明提供一种检测牛结核病IFN‑γ和牛副结核病抗体的试纸条，包括样品垫、荧光微球标记垫、NC膜、吸水纸和PVC板；其中荧光微球标记垫上包被荧光微球标记的鼠抗牛IFN‑γ单克隆抗体和荧光微球标记的牛副结核蛋白；NC膜上设有检测线T1、T2和质控线C，检测线T1包被兔抗牛IFN‑γ多克隆抗体，检测线T2包被辣根过氧化物酶标记兔抗牛IgG，质控线包被表达纯化的IFN‑γ。本发明可以直接将采取的全血加入到已经稀释好的结核菌素中，反应后直接读数。本发明可以做到一卡同时检测两种疾病。同时本发明的生产成本低，可以快速，并定量检测，优势明显。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州悦洋生物技术有限公司
发明人：	曹立辉;李雪平;窦文茂;古杰;孙贝贝;蔡晓丽;欧贤斌
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910308259.5
公开号：	CN109975538A
代理机构：	广州三环专利商标代理有限公司
代理人：	颜希文;宋静娜
分类号：	G01N33/533(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510320 广东省广州市广州国际生物岛螺旋三路8号第七层701、702单元
主权项：	1.一种检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条，其特征在于，包括样品垫、荧光微球标记垫、NC膜、吸水纸和PVC板；其中荧光微球标记垫上包被荧光微球标记的鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和荧光微球标记的牛副结核蛋白；NC膜上设有检测线T1、T2和质控线C，检测线T1包被兔抗牛IFN-γ多克隆抗体，检测线T2包被辣根过氧化物酶标记兔抗牛IgG，质控线C包被表达纯化的IFN-γ。 2.如权利要求1所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条，其特征在于，所述检测线T1、T2、质控线C之间的距离是分别5～8mm。 3.如权利要求1所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条，其特征在于，所述荧光微球的粒径为200～300nm。 4.一种如权利要求1-3任一项所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1:免疫荧光微球分别标记鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和牛副结核蛋白的制备 (1)将免疫荧光微球清洗并活化； (2)免疫荧光微球分别与鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和牛副结核蛋白进行偶联； (3)封闭免疫荧光微球上未结合表面基团； (4)将偶联完成后的免疫荧光微球置于4℃保存； S2:免疫层析试剂条的制备 (1)将样品垫、荧光微球标记垫分别用2％～5％的BSA浸泡，然后烘干； (2)将荧光微球标记鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和荧光微球标记牛副结核蛋白按照1:1的质量比混匀，用喷膜机喷到所述标记垫上； (3)将兔抗牛IFN-γ多克隆抗体稀释至效价的100倍，兔抗牛IgG-HRP(辣根过氧化物酶标记兔抗牛IgG)稀释至效价的1000倍，牛伽马干扰素(IFN-γ)稀释至浓度200ng/mL； (4)将步骤(3)稀释的溶液分别用喷膜机划线，在NC膜上分别标记为T1(兔抗牛IFN-γ多克隆抗体)、T2(兔抗牛IgG-HRP)、C线(IFN-γ)；T1、T2、C线的之间距离为5mm，最后将试纸条置于37℃烘12小时； S3:进行组装：将样品垫、荧光微球标记垫、NC膜、吸水纸依次重叠粘贴在PVC底板上，用切条机将整个大板纵向切成一定规格的试纸条，然后干燥密封储存在4℃，最后将试纸条与塑胶外壳组装形成检测卡。 5.如权利要求4所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤S1(1)中所述活化微球1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的浓度均为50mg/mL。 6.如权利要求4所述的检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤S1(2)中鼠抗牛IFN-γ单克隆抗体和牛副结核蛋白均以1:12的质量比分别与免疫荧光微球进行偶联。
所属类别：	发明专利