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原文传递一种禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒及其应用方法

专利名称：	一种禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒及其应用方法
摘要：	本发明公开了一种禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒及其应用方法，其包括，单克隆抗体H5‑M5、H7‑M4和NP‑M1。本发明蛋白抗体诊断芯片用于快速地确定不同种属动物体内是否存在禽流感病毒NP蛋白抗体，且能同时区分禽流感病毒的H5和H7亚型，以达到对禽流感及禽流感的H5、H7亚型进行早期鉴别诊断以及疫情监测的目的，并能检测不同种属，从而为禽流感诊断提供一种新方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京农业大学
发明人：	周继勇;闫丽萍;肖倩
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910294634.5
公开号：	CN109991429A
代理机构：	南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	王江南
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号
主权项：	1.一种禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：包括，单克隆抗体H5-M5、H7-M4和NP-M1。 2.如权利要求1所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：还包括，AIV-H3N2的NP蛋白、AIV-H5N1的HA蛋白、AIV-H7N9的HA蛋白，和/或其包被的蛋白芯片反应板。 3.如权利要求1或2所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：还包括，IgG酶标抗体。 4.如权利要求3所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述IgG酶标抗体为辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG抗体。 5.如权利要求1、2、4中任一项所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：还包括，洗涤液、阳性对照样品、阴性对照样品、化学发光底物。 6.如权利要求5所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述洗涤液包括TBST洗涤液，所述TBST洗涤液是包括含Tween-20的TBS，pH为7～7.5。 7.如权利要求5所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照样品为抗AIV-H5及AIV-H7的混合鸡血清，所述阴性对照样品为阴性鸡血清。 8.权利要求1～7中任一项所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒的应用方法，其特征在于：包括， AIV蛋白芯片的制备：AIV-H3N2的NP蛋白、AIV-H5N1的HA蛋白、AIV-H7N9的HA蛋白用包被液稀释后，蛋白芯片点样；血清孵育：孵育待测样品及阳性对照样品和阴性对照样品；单抗孵育：孵育所述单克隆抗体；二抗孵育：孵育所述IgG酶标抗体；检测：化学发光法检测。 9.如权利要求8所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒的应用方法，其特征在于：所述AIV蛋白芯片的制备，还包括将所述AIV-H3N2的NP蛋白、AIV-H5N1的HA蛋白、AIV-H7N9的HA蛋白溶解在含有30％乙腈水溶液中，点样缓冲液配方包括0.3MPB、0.2％Glycerin、0.01％Tritonand、1.5％Mannitol。 10.如权利要求8所述的禽流感H5、H7和NP蛋白抗体检测试剂盒的应用方法，其特征在于：所述孵育，温度均为37℃；所述检测，鸡血清的结果判定为：H5>40％为阳性，H7>40％为阳性，NP>50％为阳性；鸭血清的结果判定为：H5>30％为阳性，H7>40％为阳性，NP>20％为阳性；孔雀血清的结果判定为：H5>50％为阳性，H7>50％为阳性，NP>50％为阳性。
所属类别：	发明专利