详情

原文传递肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法

专利名称：	肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法
摘要：	本发明公开了一种肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法，属于体外诊断试剂技术领域，解决现有技术灵敏度较低、反应时间较长、成本高等技术问题。试剂盒包括以下试剂：R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的缓冲液；R2：含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液。R3：含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；本发明采用双抗体夹心法的原理，利用亲和素‑偶联标记物体系，以及采用化学发光标记物进行化学发光，大大提高了试剂盒的检测灵敏度，减少反应时间，降低试剂成本，可用于血清/血浆中的肌红蛋白含量的定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	迪瑞医疗科技股份有限公司
发明人：	韩美玉;王立英;孙成艳;高威;何浩会
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910235330.1
公开号：	CN109991425A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	刘微
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130103 吉林省长春市高新区宜居路3333号
主权项：	1.一种肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括以下试剂： R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的缓冲液； R2：含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液； R3：含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；其中，R1中链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.02％～1％；链霉亲和素包被的磁微粒的粒径是0.05～3μm，浓度为10mg/ml； R2中肌红蛋白单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:1-1:20；化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为≥0.2μg/ml。 R3中肌红蛋白单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:1-1:20；偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为≥0.7μg/ml。 2.根据权利要求1所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括以下试剂： R1：含有链霉亲和素包被的磁微粒的缓冲液； R2：含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液； R3：含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的缓冲液；其中，R1中链霉亲和素磁颗粒质量百分比为0.072％；链霉亲和素包被的磁微粒的粒径是3μm； R2中肌红蛋白单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:3；化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为0.4μg/ml。 R3中肌红蛋白单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:5；偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的浓度为1.4μg/ml。 3.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R1的制备方法为：取磁微粒，用20mM PB缓冲液清洗3次，然后稀释至10mg/ml，按照磁微粒与链霉亲和素所述的质量比添加链霉亲和素，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用20mM PB缓冲液清洗3次，加入封闭液，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用20mM PB缓冲液清洗3次，用20mM PB缓冲液稀释至10mg/ml，2-8℃保存备用，得到含有链霉亲和素包被的磁微粒的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。 4.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R2的制备方法为：取肌红蛋白单克隆抗体，用20mM PB缓冲液置换肌红蛋白单克隆抗体保存液，用20mM PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照抗体与化学发光标记物的摩尔比添加化学发光标记物，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，37℃孵育2-4h，最后对蛋白进行纯化，得到含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。 5.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，R3的制备方法为：取肌红蛋白单克隆抗体，用20mM PB缓冲液置换肌红蛋白单克隆抗体保存液，用20mM PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照抗体与偶联标记物的摩尔比进行添加偶联标记物，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，37℃孵育2-4h，最后对蛋白进行纯化，得到含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。 6.根据权利要求1-5任一项所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。 7.根据权利要求1-5任一项所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物为生物素。 8.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，还包括七个浓度的校准品和两个浓度的质控品，校准品中含有肌红蛋白的浓度分别为0ng/ml、10±1ng/ml、50±5ng/ml、100±10ng/ml、300±30ng/ml、600±60ng/ml及1200±120ng/ml；高浓度质控品中含有铁蛋白的浓度为650±65ng/ml，低浓度质控品中含有铁蛋白的浓度为160±16ng/ml，校准品或质控品的缓冲液为含有0.1mol/L的PB、0.15mol/L的氯化钠、1％的牛血清白蛋白及0.05％tween-20、pH值为6.5的缓冲液。 9.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、制备试剂R1，R1的制备方法为：取磁微粒，用20mM PB缓冲液清洗3次，然后稀释至10mg/ml，按照磁微粒与链霉亲和素所述的质量比添加链霉亲和素，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用20mM PB缓冲液清洗3次，加入封闭液，37℃孵育18-24h后，置于磁分离架上分离磁珠，去上清，用20mM PB缓冲液清洗3次，用20mM PB缓冲液稀释至10mg/ml，2-8℃保存备用，得到含有链霉亲和素包被的磁微粒的液体试剂； S2、制备试剂R2，R2的制备方法为：取肌红蛋白单克隆抗体，首先用20mM PB缓冲液置换肌红蛋白单克隆抗体保存液，用20mM PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照抗体与化学发光标记物摩尔比添加化学发光标记物，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，37℃孵育2-4h，最后对蛋白进行纯化，得到含有化学发光标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的液体试剂； S3、制备试剂R3，R3的制备方法为：取肌红蛋白单克隆抗体，首先用20mM PB缓冲液置换肌红蛋白单克隆抗体保存液，用20mM PB缓冲液稀释至1mg/ml，按照抗体与偶联标记物的摩尔比添加偶联标记物，37℃孵育2-4h进行标记，然后加入封闭液，37℃孵育2-4h，最后对蛋白进行纯化，得到含有偶联标记物标记的肌红蛋白单克隆抗体的液体试剂；所述封闭液为含2～5％BSA的20mM PB缓冲液。 10.根据权利要求1或2所述的肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测样本与R2及R3试剂孵育10min，再加入R1试剂孵育10min，加入清洗缓冲液洗涤，加入酸性激发液和碱性激发液，记录相对发光强度；其中，清洗缓冲液包括50g/L磷酸氢二钠、10g/L磷酸二氢钠、100g/L NaCl、2％的Triton-100和2％的Proclin-300；酸性激发液为过氧化氢和硝酸水溶液，过氧化氢的质量浓度为1～2％，硝酸的摩尔浓度为6～8mM；碱性激发液为氢氧化钠水溶液，氢氧化钠的摩尔浓度为0.3～0.4M。
所属类别：	发明专利