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原文传递检测甲藻细胞凋亡的方法

专利名称：	检测甲藻细胞凋亡的方法
摘要：	本发明公开了一种检测甲藻细胞凋亡的方法。所述检测甲藻细胞凋亡的方法包括步骤有：对甲藻细胞进行凋亡处理；对凋亡处理的甲藻细胞进行浓缩处理；对甲藻细胞浓缩液进行AnnexinV、PI染色处理；对染色甲藻细胞液进行成像流式检测处理；依据AnnexinV/PI散点图计算甲藻细胞的凋亡率。本发明检测甲藻细胞凋亡的方法通过成像流式细胞仪能够有效区分AnnexinV荧光、碘化丙啶荧光、叶绿素自发荧光，从而直接定量测出待测甲藻细胞中发生凋亡的甲藻细胞个数，从而得出细胞早期凋亡率，而且还具有定量可靠，分析准确，结果精度高等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳大学
发明人：	陈辉蓉;吴梓涵;黎双飞;胡章立;陈秀锐;李城彦
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910246905.X
公开号：	CN110018143A
代理机构：	深圳市恒申知识产权事务所(普通合伙)
代理人：	袁文英
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	518060 广东省深圳市南山区南海大道3688号
主权项：	1.一种检测甲藻细胞凋亡的方法，其特征在于，包括如下步骤：将待检测甲藻液采用细胞凋亡诱导剂进行细胞凋亡诱导处理；将经所述细胞凋亡诱导处理的所述甲藻液进行离心悬浮处理，获得甲藻细胞浓缩液；向所述甲藻细胞浓缩液中添加AnnexinV/FITC并进行孵育处理后，再继续加入碘化丙啶进行染色处理，获得染色甲藻细胞液；采用成像流式细胞仪对所述染色甲藻细胞液中的甲藻细胞进行流式检测，生成甲藻细胞的体积/纵横比散点图以获取所需的甲藻细胞群体；再根据选取的所述甲藻细胞群体生成AnnexinV/PI散点图；依据所述AnnexinV/PI散点图得出所述待检测甲藻液中的甲藻细胞凋亡细胞个数，依据所述甲藻细胞凋亡细胞个数计算出所述待检测甲藻液中的甲藻细胞凋亡率。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：生成所述甲藻细胞的所述体积/纵横比散点图的方法包括如下步骤：取所述染色甲藻细胞液并上机所述成像流式细胞仪，再将所述成像流式细胞仪的激光器功率调至功率上限，接着调试所述激光器功率逐步降低直至避免荧光饱和，然后生成所述体积/纵横比散点图。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：调试所述激光器功率逐步降低直至避免荧光饱和时的所述激光器功率为4-20 MV；所述染色甲藻细胞液在所述成像流式细胞仪中进样的流速为1μl/min-4μl/min。 4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：根据所述体积/纵横比散点图选取纵横比在0-0.6的甲藻细胞群体。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：根据选取的所述甲藻细胞群体生成所述AnnexinV/PI散点图的方法包括如下步骤：利用所述成像流式细胞仪的分析软件对所述甲藻细胞群体做荧光补偿处理后，再生成所述AnnexinV/PI细胞散点图。 6.根据权利要求5项所述的方法，其特征在于：利用所述成像流式细胞仪的分析软件对所述甲藻细胞群体做所述荧光补偿的方法包括如下步骤：获取叶绿素单荧光样本数据生成单荧光样本数据文件，在所述分析软件中选择补偿窗口导入所述单荧光样本数据文件后自动生成补偿矩阵，调整标红的矩阵数值，通过图像验证以后完成补偿文件，在分析数据的时候导入所述补偿文件实现对所述甲藻细胞群体做荧光补偿。 7.根据权利要求5或6项所述的方法，其特征在于：在生成所述AnnexinV/PI细胞散点图中，AnnexinV荧光为第二通道，PI荧光为第四通道，甲藻细胞所含叶绿素自发荧光在第五通道。 8.根据权利要求1-3、5-6任一所述的方法，其特征在于：依据所述甲藻细胞凋亡细胞个数计算出所述待检测甲藻液中的甲藻细胞凋亡率是按照如下公式计算：所述甲藻细胞凋亡率％＝CX/C0×100％；式中的CX为第x份待检测甲藻液中的凋亡细胞个数；C0为成像流式细胞仪所收集的第x份待检测甲藻液中总的甲藻细胞个数。 9.根据权利要求1-3、5-6任一项所述的方法，其特征在于：所述待检测甲藻液中的甲藻为塔玛亚历山大藻。 10.根据权利要求1-3、5-6任一项所述的方法，其特征在于：所述甲藻细胞浓缩液中的甲藻细胞浓度为105-106cells/ml；和/或所述AnnexinV/FITC是按照每100μl所述甲藻细胞浓缩液加入1-5μl所述AnnexinV/FITC的比例添加至所述甲藻细胞浓缩液中，其中，所述甲藻细胞浓缩液中的甲藻细胞浓度为105-106cells/ml；和/或所述碘化丙啶是按照每100μl所述甲藻细胞浓缩液加入0.1-0.5μg所述碘化丙啶的比例添加至所述甲藻细胞浓缩液中，其中，所述甲藻细胞浓缩液中的甲藻细胞浓度为105-106cells/ml。
所属类别：	发明专利