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原文传递闪光型均相化学发光技术检测心肌肌钙蛋白I/T的方法

专利名称：	闪光型均相化学发光技术检测心肌肌钙蛋白I/T的方法
摘要：	本发明公开了一种闪光型均相化学发光技术检测心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T的方法，以血清作为待测样品；包括以下步骤：抗体Ⅰ偶联发光底物，得抗体Ⅰ‑A；抗体Ⅱ偶联辣根过氧化物酶，抗体Ⅱ‑HRP；设计两种检测体系，将检测体系孵育后加入激发液，立即检测发光信号；先将cTnI/cTnT样品进行梯度稀释后作为样本进行检测，从而获得发光信号和心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T浓度所对应的公式；然后将待测样品作为样本进行检测，从而最终获得待测样品中心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T的浓度。采用该方法检测心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T，具有快速、高灵敏度的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州普鲁米生物科技有限公司
发明人：	江学成;杨晓光
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910409947.0
公开号：	CN110031635A
代理机构：	杭州中成专利事务所有限公司
代理人：	金祺
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	310052 浙江省杭州市滨江区滨安路1180号1幢2号楼2层2001-2028室-115
主权项：	1.闪光型均相化学发光技术检测心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T的方法，其特征是以血清作为待测样品；包括以下步骤： 1)、抗体Ⅰ偶联发光底物，得抗体Ⅰ-A； 2)、抗体Ⅱ偶联辣根过氧化物酶，抗体Ⅱ-HRP； 3)、检测：分成以下两种方式：方式一、当抗体Ⅰ、抗体Ⅱ为靶标cTnI/cTnT的特异性抗体时，在样本中加入本底抑制剂、抗体Ⅰ-A和抗体Ⅱ-HRP，从而组成检测体系；方式二、当抗体Ⅰ、抗体Ⅱ为靶标cTnI/cTnT的特异性抗体的抗体时，在样本中加入本底抑制剂、抗体Ⅰ-A、抗体Ⅱ-HRP以及靶标cTnI/cTnT的特异性抗体，从而组成检测体系；将上述检测体系(37±0.5)℃孵育(15±1)分钟；然后加入激发液，立即检测发光信号； 4)、判定：先将cTnI/cTnT样品进行梯度稀释后作为样本按照上述步骤3)进行检测，从而获得发光信号和心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T浓度所对应的公式；然后将待测样品作为样本按照上述步骤3)进行检测，从而获得待测样品发光信号，再将待测样品发光信号代入上式公式内，从而最终获得待测样品中心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T的浓度。 2.根据权利要求1所述的闪光型均相化学发光技术检测心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T的方法，其特征是：当检测心肌肌钙蛋白I时：抗体Ⅰ为cTnI单克隆抗体Ⅰ或山羊抗鼠IgG二抗，所述抗体Ⅰ-A为cTnI-A或GAM-A；抗体Ⅱ为cTnI单克隆抗体Ⅱ或山羊抗兔IgG二抗，所述抗体Ⅱ-HRP为cTnI-HRP或GAR-HRP；当检测心肌肌钙蛋白T时：抗体Ⅰ为cTnT单克隆抗体Ⅰ或山羊抗鼠IgG二抗，抗体Ⅰ-A为cTnT-A或GAM-A；抗体Ⅱ为cTnT单克隆抗体Ⅱ或山羊抗兔IgG二抗，抗体Ⅱ-HRP为cTnT-HRP或GAR-HRP。 3.根据权利要求2所述的闪光型均相化学发光技术检测心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T的方法，其特征是：一、检测心肌肌钙蛋白I：所述步骤1)中：抗体Ⅰ为cTnI单克隆抗体Ⅰ，发光底物为9，10-二氢吖啶，所得的得抗体Ⅰ-A为cTnI-A；所述步骤2)中：抗体Ⅱ为cTnI单克隆抗体Ⅱ，所得的抗体Ⅱ-HRP为cTnI-HRP；所述步骤3)中，采用双抗夹心法，用PBS缓冲液(PH＝7.4)将制备的cTnI-A和cTnI-HRP分别稀释，检测时，cTnI-A稀释液、cTnI-HRP稀释液、待测样品分别加50ul，再加入10ul本底抑制剂；37℃孵育15min后，加入100ul激发液立即启动检测；所述步骤4)中，所对应的公式为y＝3.60391+0.59661x；二、检测心肌肌钙蛋白T：所述步骤1)中：抗体Ⅰ为cTnT单克隆抗体Ⅰ，发光底物为9，10-二氢吖啶，所得的得抗体Ⅰ-A为cTnT-A；所述步骤2)中：抗体Ⅱ为cTnT单克隆抗体Ⅱ，所得的抗体Ⅱ-HRP为cTnT-HRP；所述步骤3)中，采用双抗夹心法，用PBS缓冲液(PH＝7.4)将制备的cTnT-A和cTnT-HRP分别稀释，检测时，cTnT-A稀释液、cTnT-HRP稀释液、待测样品分别加50ul，再加入10ul本底抑制剂；37℃孵育15min后，加入100ul激发液立即启动检测；所述步骤4)中，所对应的公式为y＝3.47698+0.67069x。 4.根据权利要求2所述的闪光型均相化学发光技术检测心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T的方法，其特征是：一、检测心肌肌钙蛋白I：所述步骤1)中：抗体Ⅰ为山羊抗鼠IgG二抗，发光底物为9，10-二氢吖啶，所得的得抗体Ⅰ-A为GAM-A；所述步骤2)中：抗体Ⅱ为山羊抗兔IgG二抗，所得的抗体Ⅱ-HRP为GAR-HRP；所述步骤3)中，采用双抗夹心法，用PBS缓冲液(PH＝7.4)将制备的GAM-A和GAR-HRP分别稀释，检测时，cTnI检测抗体、GAM-A稀释液、GAR-HRP稀释液、待测样品分别加50ul，再加入2ul本底抑制剂；37℃孵育15min后，加入100ul激发液立即启动检测；所述步骤4)中，所对应的公式为y＝3.86949+0.58246x；二、检测心肌肌钙蛋白T：所述步骤1)中：抗体Ⅰ为山羊抗鼠IgG二抗，发光底物为9，10-二氢吖啶，所得的得抗体Ⅰ-A为GAM-A；所述步骤2)中：抗体Ⅱ为山羊抗兔IgG二抗，所得的抗体Ⅱ-HRP为GAR-HRP；所述步骤3)中，采用双抗夹心法，用PBS缓冲液(PH＝7.4)将制备的GAM-A和GAR-HRP分别稀释，检测时，cTnT检测抗体、GAM-A稀释液、GAR-HRP稀释液、待测样品分别加50ul，再加入2ul本底抑制剂；37℃孵育15min后，加入100ul激发液立即启动检测；所述步骤4)中，所对应的公式为y＝3.66056+0.64391x。 5.根据权利要求1～4任一所述的闪光型均相化学发光技术检测心肌肌钙蛋白I/心肌肌钙蛋白T的方法，其特征是：本底抑制剂为浓度为10mM抗坏血酸水溶液、1mM2-氨基苯酚水溶液。
所属类别：	发明专利