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一种用于胃肠道间质肿瘤迁移的标志物ACK1及其应用
| 专利名称： | 一种用于胃肠道间质肿瘤迁移的标志物ACK1及其应用 |
| 摘要： | 一种用于胃肠道间质瘤(Gastrointestinal stromal tumors,GIST)肿瘤诊断与迁移的标志物ACK1，该标志物有以下两个特征：（1）与癌旁正常组织相比，ACK1在GIST细胞中高表达且激活；（2）靶向抑制ACK1能抑制GIST细胞的迁移，ACK1是一种非受体酪氨酸激酶，位于细胞质，主要传导跨膜蛋白接收的胞外信号到下游通路,ACK1基因位于3号染色体29，其编码蛋白含1091个氨基酸残基，分子量为145 kDa，ACK1在胃癌、肺癌等常见肿瘤中的高表达以及对肿瘤生长、迁移和浸润等方面所起的重要作用，AIM‑100是ACK1特异性靶向抑制剂。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 浙江;33 |
| 申请人： | 浙江理工大学 |
| 发明人： | 欧文斌;陈佳明 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-04-02T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-07-19T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910261493.7 |
| 公开号： | CN110031626A |
| 代理机构： | 杭州九洲专利事务所有限公司 |
| 代理人： | 翁霁明 |
| 分类号： | G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 310018 浙江省杭州市下沙高教园区白杨街道2号大街928号 |
| 主权项： | 1.一种用于胃肠道间质肿瘤迁移的标志物ACK1及其应用，其特征在于所述该标志物有以下两个特征：第一，它与癌旁正常组织相比，ACK1在GIST细胞中高表达且激活；第二：靶向抑制ACK1能抑制GIST细胞的迁移。 2.根据权利要求1所述的用于GIST肿瘤诊断与迁移的标志物ACK1，其特征在于所述检测ACK1在GIST细胞中高表达且激活的步骤为： a.将肿瘤组织和癌旁组织破碎；细胞用预冷的PBS清洗一遍；加入蛋白裂解缓冲液收集裂解液转移至1.5 mLEp管中；放于4℃冰箱的转盘上旋转过夜；13,000 rpm、4℃离心30min； 将上清液移至新离心管中，记录体积; 测量蛋白浓度，定量至2 μg/μL并与Loading Buffer混匀;将蛋白样品放入100℃金属浴煮沸10 min，离心，SDS-PAGE凝胶电泳;western blot,ECL显色液A液和B液按1:1混合后滴到膜上，用超灵敏化学发光成像仪成像； b.免疫共沉淀：裂解细胞，蛋白定量如步骤a；加入琼脂糖珠4℃混合30min，取上 清加入抗体4℃旋转混合2h，4℃离心3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用裂解缓冲液洗3次；加20 μL loading buffer ，沸水煮10分钟； SDS-PAGE，western blot。 3.根据权利要求1所述的用于GIST肿瘤诊断与迁移的标志物ACK1，其特征在于靶向抑制ACK1能抑制GIST细胞的迁移的检测包括如下步骤： a.伤口愈合实验：接种细胞至六孔板里，放置细胞培养箱中培养过夜；第二天用100 μL枪头垂直划三条竖线；用PBS漂洗2次，加入新鲜含药物的培养基培养；选取固定时间点进行拍照记录，直至对照组伤口愈合; b. 基质胶transwel细胞侵袭实验：预冷24孔板与小室，将无血清培养基稀释的基质胶铺于小室；待基质胶凝固接种细胞于小室，小室内为含药无血清培养基，孔内为含药正常培养基；48h后吸去小室内培养基，PBS清洗小室，加入甲醇固定细胞晾干；加入结晶紫将细胞染色，拍照。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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