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原文传递毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法

专利名称：	毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法
摘要：	本发明提供了一种毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法，属于微生物发酵产物分析技术领域。本发明的目的是提供一种实用的、快速的、准确的毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法。通过分析毒三素链霉菌发酵液中Lipstatin类化合物碎片离子的轮廓图以及比较它们的特征碎片离子，全面解析同类化合物的质谱裂解规律，从而实现对发酵液中未知的Lipstatin类化合物进行快速的结构鉴别。本发明操作简单，灵敏度高，抗干扰性强，具有较好的推广应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建省微生物研究所
发明人：	杨煌建;张祝兰;连云阳;严凌斌;陈洲琴;程贤;王德森
专利状态：	有效
申请日期：	2018-11-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201811429426.3
公开号：	CN110031556A
代理机构：	福州市鼓楼区京华专利事务所(普通合伙)
代理人：	林晓琴
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	350000 福建省福州市仓山区进步路25号
主权项：	1.一种毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法，其特征在于，具体操作包括：(1)毒三素链霉菌发酵液中化学成分的提取；(2)利用高效液相-电喷雾-四级杆-飞行时间质谱仪HPLC-ESI-Q-TOF-MS对提取液进行测定，根据提取液的高效液相色谱图和总离子流图，得到提取液中各化学成分的保留时间；(3)利用HPLC-ESI-Q-TOF-MS对提取液中已知化合物lipstatin和未知化合物进行质谱测定，得到不同化合物的质谱离子信号的量，初步推断化学结构；(4)通过比较提取液中已知化合物lipstatin与未知化合物的碎片离子信号，得到各化合物的质谱裂解规律，从而实现对未知成分的化合物结构鉴别。 2.如权利要求1所述的毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法，其特征在于：其中步骤(1)所述的毒三素链霉菌发酵液中化学成分的提取过程为：先将微生物毒三素链霉菌(Streptomyces toxytricini)进行发酵培养，发酵结束后过滤，收集菌丝；菌丝用95％乙醇浸泡、搅拌，收集乙醇提取液；该提取液含有利普斯他汀类代谢产物。 3.如权利要求1所述的毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法，其特征在于：其中步骤(2)所述的HPLC-ESI-Q-TOF-MS，将高效液相色谱串联在四级杆质谱仪上进行的，采用多反应模式监测。 4.如权利要求3所述的毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法，其特征在于：所述高效液相色谱的色谱条件：色谱柱为Kromasil C18，规格4.6mm×250mm，5μm，流动相为水-乙腈15:85，V/V，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，进样量为10μl。 5.如权利要求3所述的毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法，其特征在于：所述四级杆质谱仪运行条件：离子源为电喷雾离子源，正离子模式，端板偏移电压为-500V，毛细管电泳电压为3500V，载气为氦气，雾化和干燥气体为高纯度氮气，毛细管出口电压为135V，锥孔电压为65V，脱溶剂温度为350℃，干燥气流速为10L/min，雾化器压力为40psi，碰撞能量为8～45V，扫描范围为m/z 100～1700。 6.如权利要求1所述的毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法，其特征在于：其中步骤(2)所述根据提取液的高效液相色谱图和总离子流图，结果显示提取液含有8个明显化学成分，保留时间RT分别为7.23、9.40、9.79、10.29、10.83、12.49、14.59、17.39min。 7.如权利要求6所述的毒三素链霉菌发酵产物中lipstatin类代谢产物的快速鉴别方法，其特征在于：步骤(3)所述不同化合物的质谱离子信号的量，其中化合物1，RT 7.23min，分子离子峰为[M+H]+为m/z 508.3453，化学式C29H49NO6；MS2显示特征离子碎片峰m/z349.28,331.26,303.27,285.25,189.16,165.13,160.12,147.12和114.09；化合物2，RT9.40min，分子离子峰为[M+H]+为m/z490.3537，化学式C29H47NO5；MS2显示特征离子碎片峰m/z331.27,285.26,187.15,160.12,149.12,142.11,133.10和114.09；化合物3，RT 9.79min，分子离子峰为[M+H]+为m/z 510.3262，化学式C29H51NO6；MS2显示特征离子碎片峰m/z333.28,287.28,189.16,160.11,149.08,119.09和114.09；化合物4，RT 10.29min，分子离子峰为[M+H]+为m/z490.3537，化学式C29H47NO5；MS2显示特征离子碎片峰m/z 331.27,285.26,189.17,160.12,147.12,142.11,133.10和114.09；化合物5，RT 10.83min，分子离子峰为[M+H]+为m/z 478.3533，化学式C28H47NO5；MS2显示特征离子碎片峰m/z333.28,287.27,189.16,149.13,146.08,128.07和100.08；化合物6为lipstatin，RT12.49，分子离子峰为[M+H]+为m/z492.3719，化学式C29H49NO5；MS2显示特征离子碎片峰m/z 333.28,287.28,189.17,160.10,149.13,142.09,119.09和114.09；化合物7，RT 14.59min，分子离子峰为[M+H]+为m/z 506.3850，化学式C30H51NO5；MS2显示特征离子碎片峰m/z 347.28,301.29,189.16,160.10,149.13,142.09和114.09；化合物8(RT 17.39min)分子离子峰为[M+H]+为m/z 494.3851，化学式C29H51NO5；MS2显示特征离子碎片峰m/z 335.30,289.29,191.18,160.10,149.13,142.09和114.09。
所属类别：	发明专利