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原文传递一种快速检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法

专利名称：	一种快速检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法
摘要：	本发明属于生物检测技术领域，特别涉及一种能够检测产四环素类抗生素降解酶细菌的质谱方法，包括以下步骤:S1.细菌与药物共培养：将待测细菌进行培养，得到培养液，并加入四环素类抗生素标准品溶液（四环素类抗生素的终浓度为140~160μg/mL），混匀后30~40℃条件下孵育6~10h；S2.样品前处理：将孵育好的共培养物离心，吸取上清液，在靶板上进行点靶，自然晾干，随后用α‑氰基‑4‑羟基肉桂酸覆盖并再次自然晾干；S3.样品的测定和数据分析：将步骤S2中经过点靶后的靶板采用质谱法进行检测，分析质谱范围依四环素类抗生素的种类而定。本方法具有灵敏度高、准确度高及分辨率高的特点，适用于产四环素类抗生素降解酶细菌的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	华南农业大学
发明人：	孙坚;陈冲;蒋鹏;崔超月;廖晓萍;刘雅红
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910291334.1
公开号：	CN110031576A
代理机构：	广州正明知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	成姗
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	510000 广东省广州市五山路483号
主权项：	1.一种检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，将待测样品与四环素类抗生素标准品的共培养物作为实验组，只含有四环素类抗生素标准品的溶液作为阳性对照组，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测；若实验组中四环素类抗生素特异性离子峰消失，则判定待测样品为产四环素类抗生素降解酶的细菌；若观察到代表四环素类抗生素的特异性离子峰相对阳性对照组明显减弱，判定该细菌产四环素类抗生素降解酶；若观察到代表四环素类抗生素的特异性离子峰相对阳性对照组几乎不变，判定该细菌不会产出四环素类抗生素降解酶。 2.根据权利要求1所述的检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，所述四环素类抗生素为四环素、金霉素、土霉素、多西环素、米诺环素、替加环素或伊拉瓦环素中的一种或多种。 3.根据权利要求1所述的检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤: S1. 细菌与药物共培养：将待测细菌进行培养，得到培养液，加入四环素类抗生素标准品溶液，至四环素类抗生素的浓度为140~160 μg/mL，混匀后30~40℃条件下孵育6~10h； S2. 样品前处理：将孵育好的共培养物离心，吸取上清液，在靶板上进行点靶，自然晾干，随后用α-氰基-4-羟基肉桂酸覆盖并再次自然晾干； S3. 样品的测定和数据分析：将经过点靶后的靶板采用质谱法进行检测，分析质谱范围依四环素类抗生素的种类而定。 4.根据权利要求3所述的检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，所述靶板用1%色谱级甲酸、色谱级丙酮和色谱级甲醇分别对靶板超声10~15min，超声完后在超纯水中浸泡15~20min并再次用色谱级甲醇冲洗，晾干备用。 5.根据权利要求3所述的检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，所述步骤S3中设置的质谱条件为：质谱范围，1~1000m/z，离子源20kv，线性反射器2.60~2.70kv，镜头5.5~6.5kv，激光频率50Hz，脉冲离子萃取延迟114ns，激光能量50~60正线性离子模式。 6.权利要求5所述的检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，每个样品选取100个检测点，每个检测点轰击5次。 7.根据权利要求1或3所述的检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，所述方法为检测Tet(X4)及相关亚型的四环素类抗生素降解酶。 8.根据权利要求3所述的检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，步骤S1中培养液的OD600为2.0，pH=7.0。 9.根据权利要求3所述的检测产四环素类抗生素降解酶细菌的方法，其特征在于，以四环素为四环素类抗生素的代表药物进行检测，分析质谱范围为300~500m/z。
所属类别：	发明专利