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原文传递用于测定人IL-33/ST2通路抑制剂的生物学活性的方法

专利名称：	用于测定人IL-33/ST2通路抑制剂的生物学活性的方法
摘要：	本发明提供了一种用于快速测定IL‑33/ST2通路抑制剂的生物学活性的方法，所述方法包括：构建得到稳定表达NF‑κB或IL‑8报告基因的细胞株，用IL‑33刺激激活报告基因表达，并用IL‑33/ST2抗体药物阻断IL‑33信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体生物学活性。本发明针对IL‑33/ST2抗体药物的生物学活性测定建立了更加快速、准确的定量检测方法，实验周期短，操作简便，并且避免了长时间孵育和多步骤操作所带来的细胞污染和误差。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	迈威(上海)生物科技有限公司
发明人：	熊新辉;张弢;仲恺
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910512938.4
公开号：	CN110045131A
代理机构：	北京瑞恒信达知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	张伟
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	201210 上海市浦东新区自由贸易试验区法拉第路86号蔡伦路230号2幢105室
主权项：	1.一种用于测定人IL-33/ST2通路抑制剂的生物学活性的方法，所述方法包括：使用人外周血嗜碱性白血病细胞KU812/NF-κB-1#作为效应细胞，与IL-33和人IL-33/ST2通路抑制剂混合后孵育，根据测得的所述报告基因的信号值来测定所述人IL-33/ST2通路抑制剂的生物学活性，所述人IL-33/ST2通路抑制剂为IL-33单克隆抗体和/或ST2单克隆抗体，所述人外周血嗜碱性白血病细胞KU812/NF-κB-1#于2019年3月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 17414。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括： (1) 使用培养基将IL-33稀释为100pg/mL-20μg/mL，使用所述培养基将IL-33单克隆抗体和/或ST2单克隆抗体稀释为1pg/mL-1mg/mL作为起始浓度，再向下以2-5倍的体积比稀释8-12个稀释度，然后将得到的系列稀释液分别与IL-33的稀释液以1:1的体积比混合； (2) 使所述人外周血嗜碱性白血病细胞KU812/NF-κB-1#在所述培养基中以10×104-160×104个细胞/mL的密度稀释，然后以1:1的体积比分别加入到步骤(1)得到的混合液中，混合后孵育12-24 h； (3) 向步骤(2)得到的混合液中加入所述报告基因的化学发光底物，根据得到的相对化学发光单位值(RLU)拟合四参数曲线来确定所述抗体的生物学活性。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述IL-33单克隆抗体和/或ST2单克隆抗体为选自CNTO7160、GSK3772847、ANB020、AMG-282、RG-6149、MEDI 3506、REGN3500、LY-3375880、PF-06817024、MT-2990的一种或多种。 4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述IL-33的氨基酸序列示于SEQ IDNO: 1所示氨基酸序列的第111-270位。 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，使用培养基将IL-33稀释为1μg/mL。 6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，使用培养基将IL-33单克隆抗体和/或ST2单克隆抗体稀释为50μg/mL作为起始浓度，再向下以3倍的体积比稀释11个稀释度。 7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，使所述人外周血嗜碱性白血病细胞KU812/NF-κB-1#在培养基中以40×104个细胞/mL的密度稀释，然后以1:1的体积比分别加入到步骤(1)得到的混合液中。 8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，混合后孵育16 h。 9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中的培养基为IMDM+10%FBS。 10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，使用荧光素酶试剂盒检测化学发光值，根据得到的相对化学发光单位值拟合四参数曲线确定所述抗体的生物学活性。 11.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在96孔板中进行步骤(2)中所述混合后孵育，然后在酶标仪上进行步骤(3)中的读取相对化学发光单位值。 12.人外周血嗜碱性白血病细胞KU812/NF-κB-1#，所述细胞于2019年3月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 17414。 13.人外周血嗜碱性白血病细胞KU812/NF-κB-1#作为效应细胞在检测人IL-33/ST2通路抑制剂的生物学活性中的应用，其中所述人IL-33/ST2通路抑制剂为IL-33单克隆抗体和/或ST2单克隆抗体，所述人外周血嗜碱性白血病细胞KU812/NF-κB-1#于2019年3月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 17414。 14.权利要求1至11中任一项所述的方法在人IL-33/ST2通路抑制剂生产的质量控制中的应用，所述人IL-33/ST2通路抑制剂为IL-33单克隆抗体和/或ST2单克隆抗体。
所属类别：	发明专利