详情

原文传递双受体时间分辨时间分辨荧光共振能量转移法

专利名称：	双受体时间分辨时间分辨荧光共振能量转移法
摘要：	本发明提供了使用双受体时间分辨性荧光共振能量转移法确定样品中是否存在多种分析物的方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	加拿大;CA
申请人：	珀金埃尔默生物信号股份有限公司
发明人：	P.罗比;B.伯恩德;S.达汉
专利状态：	有效
申请日期：	2013-02-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910048682.6
公开号：	CN110044855A
代理机构：	北京市柳沈律师事务所
代理人：	余晓文
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	加拿大魁北克省
主权项：	1.独立地确定样品中是否存在两种分析物的方法，其包括：使所述样品接触第一分析物特异性的结合配偶体和第二分析物特异性的结合配偶体，其中所述的第一和第二分析物特异性的结合配偶体分别和镧系元素螯合物部分偶联；使所述样品暴露于能够激发所述的第一和第二分析物特异性的结合配偶体中螯合物的镧系元素的波长范围内的光下；和独立地确定是否所述第一分析物特异性的结合配偶体和所述第二分析物特异性的结合配偶体分别结合所述第一分析物和所述第二分析物，从而独立地确定所述样品中是否存在所述两种分析物。 2.确定酶对两种不同的底物是否具有活性的方法，其包括：提供包含两种不同底物的样品；在足以从所述第一底物产生第一分析物并且从所述第二底物产生第二分析物的条件下，使所述样品和酶接触；使所述样品接触第一分析物特异性的结合配偶体和第二分析物特异性的结合配偶体，其中所述第一和第二分析物特异性的结合配偶体分别和镧系元素螯合物部分偶联；使所述样品暴露于能够激发所述第一和第二分析物特有的结合部分中螯合物的镧系元素的波长范围内的光；以及独立地确定所述第一分析物特异性的结合配偶体和所述第二分析物特异性的结合配偶体是否分别结合所述第一分析物和所述第二分析物，由此确定所述酶是否对所述第一底物和所述第二底物具有活性。 3.确定两种酶是否独立地对底物具有活性的方法，其包括：提供包含底物的样品；在足以用第一酶产生第一分析物并且用第二酶产生第二分析物的条件下使所述样品和两种不同的酶接触；使所述样品接触第一分析物特异性的结合配偶体和第二分析物特异性的结合配偶体，其中所述第一和第二分析物特异性的结合配偶体分别和镧系元素螯合物部分偶联；使所述样品暴露于能够激发所述的第一和第二分析物特异性的结合配偶体的螯合物中的镧系元素的波长范围内的光；以及分别独立地确定是否所述第一分析物特异性的结合配偶体和所述第二分析物特异性的结合配偶体结合所述第一分析物和所述第二分析物，从而独立地确定所述第一酶和所述第二酶对所述底物的活性。 4.独立地确定样品中是否存在两种分析物的方法，其包括：使所述样品接触结合有第一荧光能量共振转移(FRET)受体的第一分析物特异性的结合配偶体、结合有第二FRET受体的第二分析物特异性的结合配偶体和具有镧系元素螯合物部分的化合物；使所述样品暴露于能够激发所述的第一和第二分析物特异性的结合配偶体的螯合物中的镧系元素的波长范围内的光；以及分别独立地确定是否所述第一分析物特异性的结合配偶体和所述第二分析物特异性的结合配偶体结合所述第一分析物和所述第二分析物，从而独立地确定所述样品中是否存在所述两种分析物。 5.确定两种酶是否独立地对底物具有活性的方法，其包括：提供包含底物的样品，其中所述底物标记有亲和标记物；在足以用第一酶产生第一分析物并且用第二酶产生第二分析物的条件下使所述样品和两种不同的酶接触；使所述样品具有镧系元素螯合物部分的亲和标记物特异性的结合配偶体接触；使所述样品接触第一分析物特异性的结合配偶体和第二分析物特异性的结合配偶体，其中所述第一和第二分析物特异性的结合配偶体分别偶联于检测部分，其中之一是能够被波长为约600～635nm的光所激发，而另一检测部分能够被波长为约675～725的光所激发；使所述样品暴露于能够激发所述螯合物中镧系元素的波长范围内的光；以及分别独立地确定是否所述第一分析物特异性的结合配偶体和所述第二分析物特异性的结合配偶体结合所述第一分析物和所述第二分析物，从而独立地确定所述第一酶和所述第二酶对所述底物的活性。 6.权利要求1～3所述的方法，其中在所述两个螯合物部分中的镧系元素是相同的。 7.权利要求1～3所述的方法，其中所述偶联后的螯合物部分在两个结合配偶体中是相同的。 8.权利要求1～3所述的方法，其中所述第一和第二分析物分别独立地偶联于检测部分。 9.权利要求8所述的方法，其中所述检测部分之一能够被波长为约600～635nm的光所激发，而另一检测部分能够被波长为约675～715nm的光所激发。 10.权利要求1～5的方法，其中所述镧系元素选自由铕、铽、钐和镝组成的组。 11.权利要求1～5的方法，其中使所述样品暴露于波长为约315～350nm的光。 12.权利要求1～5的方法，其中使所述样品暴露于波长为约320～340的光。 13.权利要求1～5的方法，其中确定所述第一分析物特异性的结合配偶体是否结合所述第一分析物包括检测波长为约655～675nm的发射光。 14.权利要求1～5的方法，其中确定所述第二分析物特异性的结合配偶体是否结合所述第二分析物包括检测波长为约715～740nm的发射光。 15.权利要求1～5的方法，其中所述第一和第二分析物特异性的结合配偶体分别包括分析物结合分子。 16.权利要求1～5所述的方法，其中所述样品对可见光是不透明的。 17.权利要求1～5所述的方法，其中所述样品包括纯化分子、膜、组织提取液、血液(以及包含血清和血浆的血液衍生物)、细胞溶胞产物和细胞培养上清液，以及其它生物流体(脑脊液、尿)。 18.权利要求4所述的方法，其中所述第一和第二分析物分别包括亲和标记物，并且具有镧系元素螯合物部分的所述化合物进一步包括亲和标记物特异性的结合配偶体。
所属类别：	发明专利