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原文传递一种四环素化学发光酶联免疫检测试剂盒

专利名称：	一种四环素化学发光酶联免疫检测试剂盒
摘要：	本发明公开了一种四环素化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒包括四环素基因工程抗体，以及其他酶联免疫检测所需试剂，如包被有四环素包被抗原的化学发光酶标板，四环素标准品，酶标抗体，化学发光液和洗涤液。本发明的试剂盒具有高通量检测、高灵敏度、高特异性、高精密度、高稳定性、检测范围宽、分析速度快、准确的优点；标准曲线最大检测范围为15～120pg/mL，灵敏度45pg/mL，检出限40pg/mL；且无毒、环保、经济，可通过基因工程技术进行大量生产，对培养基无特殊要求，发酵密度高、发酵周期短，制造成本低。该试剂盒非常适用于四环素残留的痕量分析与批量样品的筛查检测，具有重要的现实意义和推广应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州元睿生物科技有限公司
发明人：	于运威
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910436476.2
公开号：	CN110058011A
代理机构：	广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：	任重
分类号：	G01N33/532(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510670 广东省广州市黄埔区香山路17号B304房
主权项：	1.一种四环素基因工程抗体，其特征在于，所述四环素基因工程抗体的制备方法：以经过四环素免疫抗原免疫的动物细胞的总RNA为模版，利用SEQ ID NO.1～4所示引物RT-PCR扩增出抗体的轻链可变区基因、重链可变区基因，并将其连接起来后插入载体pCANTAB5E，在大肠杆菌中表达获得四环素基因工程抗体。 2.根据权利要求1所述四环素基因工程抗体，其特征在于，轻链的扩增条件为：94℃×5min变性，加入1μL 2.5U高保真Pfu酶，进行以下循环：94℃×30s，54℃×1min，72℃×1min，共25个循环，最后72℃延伸10min。 3.根据权利要求1所述四环素基因工程抗体，其特征在于，重链的扩增条件为：94℃×5min变性，加入1μL 2.5U高保真Pfu酶，进行以下循环：94℃×30s，60℃×1min，72℃×1min，共30个循环，最后72℃延伸10min。 4.根据权利要求1所述四环素基因工程抗体，其特征在于，以扩增出的轻链片段和重链片段互为模板，通过PCR完成VH--VL片段的预拼接，以预拼接产物的稀释液为模板进行VH--VL全长基因的拼接，并采用引物Q-B/Q-F对抗体进行二次PCR扩增，得到全长抗体基因片段，将片段用Bgl I及Not I双酶切后，与载体pCANTAB5E连接，转化大肠杆菌TG3进行IPTG诱导表达。 5.一种四环素化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求1～4任一所述四环素基因工程抗体。 6.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，还含有包被有四环素包被抗原的化学发光酶标板，四环素标准品，酶标抗体，化学发光液和洗涤液。 7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述的四环素包被抗原为重氮化后的对氨基苯甲酸与四环素的酚羟基的对位发生偶氮化，进而引入羧基，含羧基的四环素半抗原与牛血清白蛋白BSA的偶联物；四环素包被抗原的包被浓度为0.5mg/L。 8.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述的酶标抗体为辣根过氧化酶标记的羊抗鼠IgG或羊抗兔IgG。 9.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述的化学发光液由A液和B液组成，A液为100mL去离子水中含有20mg对碘苯酚、8mg鲁米诺、1.21g Tris，pH8.4；B液为100mL去离子水中含有体积分数0.40％H2O2、1.21g Tris，pH7.0；使用时将A液和B液按体积比1:1的比例混合；所述的洗涤液为20倍浓缩洗涤液，20倍浓缩洗涤液是含有体积分数0.5％Tween20的pH7.4 0.4mol/L的磷酸盐缓冲液。 10.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，使用时对待测样品的预处理处理方法如下：待测样品为奶样：用PBST稀释，离心取上清液测定；待测样品为鸡蛋：蛋液用PBS溶液稀释，离心取上清液测定；所述PBS溶液中含0.1％曲拉通x-100；待测样品为组织样品：分别取鸡、猪的鸡肉、肝脏或肾脏组织样品，加Mcllvaine缓冲液，振荡离心，取上清液备用；Oasis HLB固相萃取柱依次用无水甲醇、水预洗；取备用上清液过柱，用水淋洗，挤干；用草酸甲醇溶液洗脱，挤干，收集洗脱液；将收集的洗脱液摇匀，用PBST溶液稀释后作为试样溶液待测。
所属类别：	发明专利