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原文传递一种重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法及其应用

专利名称：	一种重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法及其应用
摘要：	本发明涉及一种重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法及其应用，所述生物活性分析方法包括：将重组抗VEGFR2单克隆抗体与人脐静脉内皮细胞和VEGF试剂进行共培养，然后加入CCK8显色液继续培养，读取吸光值，根据重组抗VEGFR2单克隆抗体浓度与吸光值的量效关系进行4‑参数拟合，根据曲线拟合的EC50值进行生物活性评价。该方法是一种专门针对于重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，灵敏度高、准确度高，且适用范围广，对不同效价水平的重组抗VEGFR2单克隆抗体均能进行检测，对重组抗VEGFR2单克隆抗体的中间体、原液或成品的生物活性均能进行检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	上海博威生物医药有限公司
发明人：	王少雄;吕品
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN201911417826.7
公开号：	CN111024949A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N33/577;C12N5/071;G;C;G01;C12;G01N;C12N;G01N33;C12N5;G01N33/577;C12N5/071
申请人地址：	201318 上海市浦东新区周浦镇蓝靛路1199号2幢301室
主权项：	1.一种重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述生物活性分析方法包括：将重组抗VEGFR2单克隆抗体与人脐静脉内皮细胞和VEGF试剂进行共培养，然后加入CCK8显色液继续培养，读取吸光值，根据重组抗VEGFR2单克隆抗体浓度与吸光值的量效关系进行4-参数拟合，根据曲线拟合的EC50值进行生物活性评价。 2.如权利要求1所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述进行共培养时，人脐静脉内皮细胞的活细胞密度为0.5×105-1×105细胞/mL；优选0.5×105细胞/mL。 3.如权利要求1或2所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述进行共培养时，VEGF试剂的浓度为0.2-2μg/mL；优选0.5μg/mL。 4.如权利要求1-3中任一项所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述共培养的时间为60-70h。 5.如权利要求1-4中任一项所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述共培养的温度为35-39℃。 6.如权利要求1-5中任一项所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述加入CCK8显色液继续培养的时间为3.5-4h。 7.如权利要求1-6中任一项所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述加入CCK8显色液继续培养的温度为35-39℃。 8.如权利要求1-7中任一项所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述读取吸光值是使用酶标仪读取，检测波长450nm，参比波长620nm。 9.如权利要求1-8中任一项所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法，其特征在于，所述生物活性分析方法具体包括如下步骤： (1)将对数生长期的人脐静脉内皮细胞进行消化并制成单细胞悬液，用ECM完全培养基调整其活细胞密度，于35-39℃下培养5-7h，弃上清，换用0.1％FBS的ECM培养基继续培养12-18h； (2)向步骤(1)孵育后的细胞中加入重组抗VEGFR2单克隆抗体溶液，于35-39℃下培养1.5-2.5h； (3)向步骤(2)处理后的样品中加入VEGF试剂，于35-39℃下培养60-70h； (4)向步骤(3)处理后的样品中加入CCK8显色液继续培养3.5-4h，用酶标仪读取吸光值，检测波长450nm，参比波长620nm，根据重组抗VEGFR2单克隆抗体浓度与吸光值的量效关系进行4-参数拟合，根据曲线拟合的EC50值进行生物活性评价。 10.如权利要求1-9中任一项所述的重组抗VEGFR2单克隆抗体的生物活性分析方法在检测重组抗VEGFR2单克隆抗体的中间体、原液或成品的生物活性中的应用。
所属类别：	发明专利