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原文传递检测平菇中吲哚乙酸含量的方法

专利名称：	检测平菇中吲哚乙酸含量的方法
摘要：	本发明公开了一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，利用预冻的80%冰甲醇提取平菇样品中的吲哚乙酸，利用三氯化铁的无机酸溶液作为显色液，采用分光光度计测定样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量。本发明利用在‑20℃预冻12h以上的80%冰甲醇（甲醇:水=4:1）作为提取溶剂，能够有效提取平菇中的吲哚乙酸。本发明利用吲哚乙酸在高氯酸环境中与三价铁离子生成红色络合物的原理，采用分光光度计法测定平菇中吲哚乙酸在530nm处的吸光值，该方法不仅操作简单、成本低，还具有较高的灵敏度和检测精度，还能够同批次检测多个平菇样品中的吲哚乙酸含量，分析速度快，为研究吲哚乙酸对平菇生长发育机制的影响提供技术基础。
专利类型：	发明专利
申请人：	河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所
发明人：	孔维丽;宋志波;韩玉娥;崔筱;刘芹;张玉亭;康源春;袁瑞奇;孔维威;胡素娟;段亚魁
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T05:00:00+0805
申请号：	CN202010040839.3
公开号：	CN111103282A
代理机构：	郑州异开专利事务所(普通合伙)
代理人：	韩鹏程
分类号：	G01N21/78;G01N21/31;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/78;G01N21/31
申请人地址：	450002 河南省郑州市金水区花园路116号
主权项：	1.一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：采用分光光度计测定平菇样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量，具体包括以下步骤：第一步，称取平菇样品于无菌研钵中，向无菌研钵中快速加入3～10mL预冻的80%冰甲醇，研磨，将研磨后的平菇浆液移取至离心管内，用80%冰甲醇将平菇浆液定容，离心分离，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液，备用；第二步，称取吲哚乙酸于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，然后用蒸馏水定容，混匀，得到吲哚乙酸贮备液；将吲哚乙酸贮备液稀释得到不同浓度的吲哚乙酸标准溶液；第三步，移取第二步稀释得到的各吲哚乙酸标准溶液于不同的反应管内，以等体积的蒸馏水作为空白，然后向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入显色液，混匀，恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定吲哚乙酸标准液的吸光值，以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线；第四步，移取第一步中的样品提取液于反应管内，以与样品提取液等体积的蒸馏水为空白，向样品提取液和空白中分别加入显色液，遮光恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定平菇样品的吸光值，根据第三步中绘制的吲哚乙酸标准曲线计算得到样品提取液中吲哚乙酸的浓度，再利用下述公式计算平菇样品中吲哚乙酸的含量：平菇样品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V1）÷（W×V2）；其中，A为第四步中参加显色反应的菌丝提取液中吲哚乙酸的浓度，μg/mL；V1为平菇样品提取液的总体积，mL；W为平菇样品的重量，g；V2为第四步中参加显色反应的样品提取液体积，mL。 2.根据权利要求1所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第二步中吲哚乙酸贮备液的浓度为100μg/mL，所述吲哚乙酸标准液的浓度梯度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL和25μg/mL。 3.根据权利要求1所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第三步和第四步中的显色液均由浓度为0.5M的FeCl3和35%高氯酸按照1:50的体积比配制而成。 4.根据权利要求1所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第一步中的具体离心方法如下：将定容后的平菇浆液于4℃、5000r/min条件下离心10min，弃沉淀，再将上清液再于4℃、5000r/min条件离心10min，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液。 5.根据权利要求1所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：所述第一步中80%冰甲醇的预冻温度为-20℃。
所属类别：	发明专利