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原文传递一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法

专利名称：	一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法
摘要：	本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法。本方法用甲醇超声提取工业大麻提取物中的大麻素物质，高效液相色谱仪（HPLC）进行检测。采用保留时间定性，外标法定量得到工业大麻提取物中一种或几种大麻素的含量。本方法操作简单、稳定性好，使得工业大麻提取物中的多种大麻素类物质得到快速准确的定量。
专利类型：	发明专利
申请人：	云南绿新生物药业有限公司
发明人：	刘胜贵;王钲霖;马海悦;付彬彬;李智高;孔令羽
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T20:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T08:00:00+0805
申请号：	CN202010066681.7
公开号：	CN111122744A
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74
申请人地址：	655000 云南省曲靖市沾益区城西工业园区
主权项：	1.一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）样品的前处理：准确称取工业大麻花叶提取物，加入有机溶剂，超声提取，静置，过滤膜得到样品处理液；（2）标准工作溶液的配置：分别制备不同浓度梯度的各个大麻素标准对照品溶液；（3）用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测；高效液相色谱仪（HPLC）条件如下：流动相为乙腈（色谱纯）和水（去离子水），乙腈与水的比例为65%：35%，等度洗脱，流速为1mL/min；进样量为10uL；柱温为30℃；检测器检测波长为220 nm。 2.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述工业大麻提取物包括工业大麻粗提浸膏、CBD油、工业大麻全谱（广谱）油。 3.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述大麻提取物的制备方法如下：（1）提取：工业大麻的花叶经干燥、粉碎后，利用超临界二氧化碳萃取，得到粗提浸膏；萃取釜压力15～30MPa，萃取温度为35～60℃、萃取时间为0.5～3小时；解析釜温度为35～50℃、解析压力为1～15MPa；（2）分离纯化：层析柱中装填硅胶，采用干法或者湿法上样（即提取浸膏），流动相洗脱，分离出大麻素类物质，分段收集，浓缩后用载体油稀释得成品；硅胶目数60～400目，流动相可以采用正己烷-乙酸乙酯、石油醚-乙酸乙酯、正己烷-二氯甲烷、石油醚-二氯甲烷，或其中几种溶剂的混合溶剂；层析方式可以采用常压或加压；洗脱方式可以采用等度洗脱或梯度洗脱；洗脱液分段浓缩，浓缩温度35～60℃。 4.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述大麻素物质包括次大麻二酚（CBDV）、大麻萜酚（CBG）、大麻二酚（CBD）、大麻酚（CBN）、四氢大麻酚（THC）、大麻色烯（CBC）中的一种或几种。 5.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述有机溶剂为色谱纯甲醇，所述大麻提取物质量与所述甲醇体积的比例为1：50。 6.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述超声时间为30min，超声功率为250W，工作频率为40kHz。 7.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述静置时间为30min。 8.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述滤膜为0.22μm的有机系针头滤膜。 9.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述标准对照品工作溶液配置方法为：分别将购自Sigma公司的几种大麻素标准对照品用色谱纯甲醇稀释至浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的系列标准工作溶液。 10.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪品牌型号为安捷伦1260；色谱柱为AgilentZORBAX Eclipse Plus C18；所述检测器为二极管阵列检测器(简称DAD检测器)。
所属类别：	发明专利