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一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法
| 专利名称： | 一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法 |
| 摘要： | 本发明提供一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法，包括以下步骤：将S. japonicum虫卵研磨，用灭菌生理盐水配成5%悬液，置4℃浸泡3天，期间于‑20℃和室温间反复冻融10次，然后超声裂解，离心取上清液备用；将上清液过葡聚糖凝胶柱，然后收集分离得到的抗原组分，‑20℃保存备用；将收集的抗原组分在PVDF膜上点样，室温放置1小时，然后将膜置于1%BSA(W/V)的PBST中4℃过夜封闭，PBST洗膜3次，再与S. japonicum阳性病牛血清室温振荡作用1小时，PBST洗膜3次，再与羊抗牛IgG‑hrp室温振荡作用1小时，PBST洗膜3次，ECL化学发光显色进行鉴定。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请人： | 西南民族大学 |
| 发明人： | 郝力力;郭莉;袁东波;阳爱国 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 1900-01-20T17:00:00+0805 |
| 发布日期： | 1900-01-20T01:00:00+0805 |
| 申请号： | CN202010121753.3 |
| 公开号： | CN111089959A |
| 代理机构： | 成都天汇致远知识产权代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 韩晓银 |
| 分类号： | G01N33/545;G01N33/531;G01N21/76;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/545;G01N33/531;G01N21/76 |
| 申请人地址： | 610041 四川省成都市武侯区一环路南四段16号 |
| 主权项： | 1.一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤： 步骤1，样品制备：将S. japonicum虫卵研磨，用灭菌生理盐水配成5%悬液，置4℃浸泡3天，期间于-20℃和室温间反复冻融10次，然后超声裂解，12000rpm离心1小时，取上清液备用； 步骤2，样品分离：将步骤1制备的上清液过葡聚糖凝胶柱，然后收集分离得到的抗原组分，-20℃保存备用； 步骤3，样品鉴定：将收集的抗原组分在PVDF膜上点样，1μg/点，室温放置1小时，然后将膜置于1%BSA(W/V)的PBST中4℃过夜封闭，PBST洗膜3次，每次5min，再与1:100倍稀释的S. japonicum阳性病牛血清室温振荡作用1小时，PBST洗膜3次，每次5min，再与1:20000倍稀释的羊抗牛IgG-hrp室温振荡作用1小时，PBST洗膜3次，每次5min，ECL化学发光显色进行鉴定。 2.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法，其特征在于：所述超声裂解的条件为：超声功率为400-500W，时间为10-30min。 3.根据权利要求1所述的一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法，其特征在于：所述葡聚糖凝胶柱的制备方法为：称取3g葡聚糖凝胶G-200至烧杯中，加入去离子水300ml，室温过夜溶胀，次日更换去离子水，沸水浴1小时，冷却后装柱，然后用pH4.0-5.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液平衡过夜。 4.根据权利要求3所述的一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法，其特征在于：所述将步骤1制备的上清液过葡聚糖凝胶柱，具体操作为：向葡聚糖凝胶柱内分多次加入步骤1制备的上清液，每次加入量为柱体积的5%，用pH4.9的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液洗脱抗原，流速为0.25ml/min。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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