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原文传递联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒及制备方法

专利名称：	联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒及制备方法
摘要：	本发明公开了联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒及其制备方法，涉及生物医药领域，采用抗原抗体夹心法和胶体金免疫层析法原理定性检测人血清或血浆中是否存在抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgM抗体和/或抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体，运用胶体金标记含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白形成金标N蛋白后吸附在金标垫上，以含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白作为指示标记物，在NC膜的IgM检测线上包被鼠抗人u链单抗、在IgG检测线上包被鼠抗人IgG单抗及在NC膜的质控线上包被鼠抗6×His单抗，实现对抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgM/IgG抗体定性检测，具有使用方便、灵敏度高、检测时间短的优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	中山生物工程有限公司
发明人：	王胜岚;马玉兰;吴伟铭;肖慧芳;范洁云
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T01:00:00+0805
申请号：	CN202010218543.6
公开号：	CN111089962A
代理机构：	中山市捷凯专利商标代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	杨连华
分类号：	G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
申请人地址：	528400 广东省中山市火炬开发区国家健康基地生物谷大道1号
主权项：	1.联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒，包括盒体、位于所述盒体内的粘贴支架（1），所述粘贴支架（1）上延长度方向依次粘贴有样本垫（2）、金标垫（3）、NC膜（4）、吸样垫（5），所述NC膜（4）上靠近所述金标垫（3）侧设有IgM检测线（41）和IgG检测线（42），所述NC膜（4）上靠近所述吸样垫（5）侧设有质控线（43），其特征在于：所述金标垫（3）含有金标N蛋白，所述金标N蛋白为由胶体金标记的含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白；所述IgM检测线（41）上包被有鼠抗人u链单抗；所述IgG检测线（42）上包被有鼠抗人IgG单抗；所述质控线（43）上包被有鼠抗6×His单抗。 2.根据权利要求1所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒，其特征在于，所述金标N蛋白的制备方法包括以下步骤： S101、胶体金制备：取2mL1wt%氯金酸加入100mL水溶液中，加热至沸腾，再加入2-5mL1wt%柠檬酸三钠混匀，煮沸待胶体金溶液颜色由蓝经紫变紫红后，冷却； S102、金标液制备：取1mL胶体金加入100μL 0.1M、pH7.2的PB，混匀后加入0.1MNaOH溶液调节pH值至7.2-7.6，加入15-25μg含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白充分混匀，再加入100μL10vol%的牛血清白蛋白混匀； S103、金标液纯化：将金标液离心后弃去上清，加入含有20wt%蔗糖的金标复溶液溶解，即得。 3.根据权利要求1所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒，其特征在于：所述金标N蛋白中胶体金的粒径为15-30nm。 4.根据权利要求1所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒，其特征在于：所述质控线（43）上鼠抗6×His单抗的包被浓度为0.75-1mg/ml，所述IgM检测线（41）上鼠抗人u链单抗包被浓度为1.0－1.5mg/ml，所述IgG检测线（42）上鼠抗人IgG单抗包被浓度为1.0－1.5mg/ml。 5.根据权利要求1所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒，其特征在于：所述金标N蛋白中胶体金与含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白在蛋白质的等电点附近进行抗体交联。 6.根据权利要求1所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒，其特征在于：所述金标垫（3）上含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白含量高于所述IgM检测线（41）上鼠抗人u链单抗含量和所述IgG检测线（42）上鼠抗人IgG单抗含量的总量。 7.根据权利要求1所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒，其特征在于：所述的样本垫（2）材质为玻璃纤维膜，经过含Tris、酪蛋白钠盐、PVP-10的处理液进行处理过夜。 8.根据权利要求1所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒，其特征在于：所述的金标垫（3）材质为玻璃纤维膜，经过含Tris、S-17、牛血清白蛋白的处理液处理。 9.一种根据权利要求1-8任一项所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、金标垫（3）的制备：采用胶体金标记含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白制得金标N蛋白，并将金标N蛋白喷涂在玻璃纤维膜上，干燥得到金标垫（3）； S2、NC膜（4）的制备：将鼠抗人u链单抗包被在硝酸纤维素膜上形成IgM检测线（41），将鼠抗人IgG单抗包被在硝酸纤维素膜上形成IgG检测线（42），将鼠抗6×His单抗包被在硝酸纤维素膜上形成质控线（43）； S3、切割装配：在粘贴支架（1）的长度方向上依次粘贴样本垫（2）、步骤S1制得的金标垫（3）、步骤S2制得的NC膜（4）以及吸样垫（5），切割成3.5mm±0.5mm宽的试纸条，装入盒体，即得。 10.根据权利要求9所述的联合检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的胶体金试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤S1中，所述金标垫（3）上金标N蛋白的喷涂量为1.4-2.0μL/cm。
所属类别：	发明专利