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原文传递孕酮和β-hCG的二联层析检测卡及其制备方法和检测方法

专利名称：	孕酮和β-hCG的二联层析检测卡及其制备方法和检测方法
摘要：	本发明公开了一种孕酮和β‑hCG的二联层析检测卡，包括监测壳和装载于监控壳内的试纸条；所述试纸条包括：底板、样品垫、NC膜和吸水纸；所述底板的相对两端分别覆盖样品垫和吸水纸，中间覆盖NC膜；所述样品垫和吸水纸靠近NC膜的一侧均搭接在NC膜两边沿上；所述NC膜上由样品垫方向向吸水纸方向依次设有平行的第一检测线、第二检测线和质控线；所述第一检测线为孕酮单克隆抗体，第二检测线为β‑hCG单克隆包被抗体，质控线为羊抗兔抗体。本发明通过使用量子点微球技术解决了普通荧光检测技术存在的易光漂白和光解的缺陷，将孕酮和β‑hCG进行联检，确保灵敏度和准确度的同时，更加方便快捷。
专利类型：	发明专利
申请人：	云奥生物科技(常州)有限公司
发明人：	王锐
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T12:00:00+0805
申请号：	CN201911317885.7
公开号：	CN111141917A
代理机构：	常州易瑞智新专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	路锐
分类号：	G01N33/76;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/76;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533
申请人地址：	213000 江苏省常州市新北区乐山路36号
主权项：	1.一种孕酮和β-hCG的二联层析检测卡，其特征在于，包括检测壳和装载于检测壳内的试纸条；所述试纸条包括：底板、样品垫、NC膜和吸水纸；所述底板的相对两端分别覆盖样品垫和吸水纸，中间覆盖NC膜；所述样品垫和吸水纸靠近NC膜的一侧均搭接在NC膜两边沿上；所述NC膜上由样品垫方向向吸水纸方向依次设有平行的第一检测线、第二检测线和质控线；所述第一检测线为孕酮单克隆抗体，第二检测线为β-hCG单克隆包被抗体，质控线为羊抗兔抗体。 2.根据权利要求1所述的孕酮和β-hCG的二联层析检测卡，其特征在于，所述NC膜制备方法包括：分别将孕酮单克隆包被抗体、β-hCG单克隆包被抗体以及所述羊抗兔抗体用包被液调节浓度为0.1～1mg/mL，将孕酮单克隆抗体喷到NC膜的第一检测线，将β-hCG单克隆包被抗体喷到NC膜的第二检测线，将羊抗兔抗体喷到NC膜的质控线，检测线和质控线间隔3～8mm，置于恒温恒湿烘箱，干燥恒温密封保存，备用。 3.根据权利要求1所述的孕酮和β-hCG的二联层析检测卡，其特征在于，所述烘箱湿度＜30％、温度为30～60℃，干燥18～72h后于2～30℃密封保存，备用。 4.根据权利要求1所述的一种孕酮和β-hCG的二联层析检测卡，其特征在于，所述样品垫需进行处理，处理步骤如下：步骤一、样品垫用缓冲液浸泡后，置于恒温恒湿的烘箱，干燥后密封保存；步骤二、将量子点荧光微球标记的孕酮及β-hCG单克隆抗体和量子点荧光微球标记的兔IgG抗体分别用标记处理液喷涂在干燥后的样品垫上，喷量为2～8ul/cm；步骤三、将制备好的样品垫置于湿度＜30％、温度为30～60℃的烘箱，干燥18～48h后于2～30℃密封保存。 5.根据权利要求4所述的孕酮和β-hCG的二联层析检测卡，其特征在于，所述步骤一中缓冲液包含10mM～200mM的PB缓冲液，0.2％～10％的BSA，0.2％～10％的蔗糖，0.05mg/mL～1.5mg/mL的RBC抗体。 6.根据权利要求4所述的孕酮和β-hCG的二联层析检测卡，其特征在于，所述步骤一控制烘箱湿度＜30％、温度为30～60℃，干燥18～48h后于2～30℃密封保存。 7.根据权利要求4所述的一种孕酮和β-hCG的二联层析检测卡，其特征在于，所述步骤二中量子点荧光微球标记的孕酮、β-hCG单克隆抗体及兔IgG抗体制备方式相同，制备步骤如下： a、取量子点荧光微球，用30～150mM、pH5.0～6.5MES缓冲液调节浓度为30mM～230mM； b、混匀后加入终浓度为20mM～250mM的EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)及终浓度为20mM～250mM的NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)混匀； c、室温孵育5～30min后，8000～15000rpm离心5～50min，去除上清液分离得到沉淀物，用10～100mM、pH6.0～7.0MES缓冲液溶解，将复溶后的量子点荧光微球超声分散，按照0.1～1.5mg/mL量子点荧光微球的比例加入孕酮或β-hCG单克隆抗体或羊抗兔抗体，混匀后室温反应0.5～2h； d、加入5％～25％的BSA溶液混匀，室温反应0.5～2h后，8000～15000rpm离心5～30min，去除上清液分离得到沉淀物用微球复溶液液复溶，2～8℃保存。 8.权利要求1-7任一项所述的孕酮和β-hCG的二联层析检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在PVC底板上依次粘贴处理过的样品垫和NC膜以及吸水纸，然后切割成2～5mm宽度的若干试纸条。 9.权利要求1-7任一项所述的孕酮和β-hCG的二联层析检测卡的检测方法，其特征在于，包括对孕酮和β-hCG检测，具体包括以下步骤：步骤S1、线性、检测限验证；步骤S2、重复性验证；步骤S3、准确度验证；步骤S4、线性范围的验证；步骤S5、相关性验证。
所属类别：	发明专利