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原文传递一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法

专利名称：	一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法
摘要：	本发明公开了一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，包括以下步骤：选取样品：选取肌红蛋白(Myoglobin，Mb)和脱辅基肌红蛋白(Apomyoglobin，ApoMb)为蛋白质样品，肌红蛋白和脱辅基肌红蛋白的质量均为150μg；制备溶液：将肌红蛋白和脱辅基肌红蛋白溶于1.5mL的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中，得到蛋白质溶液；本发明通过设置选取样品、制备溶液、反应、加入碳酸氢铵、煮沸、制备肽段溶液和进行检测的工艺流程，解决了目前多数试剂会中和赖氨酸侧链的正电荷，导致标记后蛋白质结构的改变以及活性丧失的问题，该质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，具备能够用于考察蛋白质结构的细微构象变化，在标记过程中蛋白质活性保持不变的优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	郑州大学
发明人：	李江峰;史晓奕;刘佳鑫
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T20:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
申请号：	CN201911329061.1
公开号：	CN111157634A
代理机构：	重庆百润洪知识产权代理有限公司
代理人：	姚琼斯
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06
申请人地址：	450001 河南省郑州市科学大道100号
主权项：	1.一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：选取样品：选取肌红蛋白(Myoglobin，Mb)和脱辅基肌红蛋白(Apomyoglobin，ApoMb)为蛋白质样品，肌红蛋白和脱辅基肌红蛋白的质量均为150μg；步骤2：制备溶液：将肌红蛋白和脱辅基肌红蛋白溶于1.5mL的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液中，得到蛋白质溶液；步骤3：反应：蛋白质溶液中加入甲醛(CH2O)和氰基硼氢化钠(NaBH3CN)，甲醛(CH2O)的要求为4.8μL，4％，氰基硼氢化钠(NaBH3CN)的值为4.8μL，0.6mol/L，氰基硼氢化钠(NaBH3CN)的终浓度为2mmol/L；步骤4：加入碳酸氢铵：溶液中加入75μL，1mol/L的碳酸氢铵(NH4HCO3)进行反应，碳酸氢铵(NH4HCO3)的终浓度为50mmol/L；步骤5：煮沸：溶液以100℃的温度煮沸4min，使蛋白变性；步骤6：制备肽段溶液：加热完成后加入糜蛋白酶(Chymotrypsin)，得到肽段溶液；步骤7：进行检测：对得到的酶解肽段溶液进行酸化处理，使用液相色谱仪和质谱仪对溶液进行液相色谱分离和质谱检测。 2.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤2中，溶液中蛋白质的浓度为0.1μg/μL，4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液为20mmol/L，PH值为7。 3.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤3中，反应温度为4-40℃，室温下反应时间为5-200min。 4.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤4中，室温下进行反应，反应时间20min。 5.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤4中，碳酸氢铵与甲醛的摩尔浓度比的范围为10-100。 6.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤6中，糜蛋白酶与蛋白质的质量比为1:25。 7.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤6中，在水浴中酶解7小时，水浴温度37℃。 8.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤7中，液相色谱仪型号为Thermo Accela，质谱仪型号为Thermo LTQ-OrbitrapVelos。 9.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤7中，先用液相色谱仪对肽段溶液进行液相色谱分离，再使用质谱仪进行质谱检测。 10.根据权利要求1所述的一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：所述在步骤7中，检测完成后检测结果打印多份，对其中一份进行封档保存。
所属类别：	发明专利