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原文传递一种利用酶标仪快速测定烟草中葡萄糖含量的方法

专利名称：	一种利用酶标仪快速测定烟草中葡萄糖含量的方法
摘要：	本发明公开了一种利用酶标仪快速测定烟草中葡萄糖含量的方法。包括样品前处理、标准工作曲线绘制、样品溶液葡萄糖浓度推算、准确定量计算。本发明首创将酶标仪用于烟草及烟草制品中葡萄糖含量的快速准确定量，烟草样品中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将还原性的4‑氨基安替比林与酚偶联缩合成有紫外吸收的醌类化合物，用酶标仪在505nm处比色测定，依据吸光度与葡萄糖的定量关系推算出样品中的葡萄糖的含量。该方法操作简便、快速、分析效率高、准确度和精密度高、稳定性好，具有良好的应用前景。
专利类型：	发明专利
申请人：	云南省烟草质量监督检测站
发明人：	彭丽娟;王春琼;李苓;杨龙祥
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T07:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
申请号：	CN202010012516.3
公开号：	CN111157472A
代理机构：	昆明协立知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	谢嘉
分类号：	G01N21/31;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/44;G;G01;G01N;G01N21;G01N1;G01N21/31;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/44
申请人地址：	650000 云南省昆明市高新开发区科医路41号
主权项：	1.一种利用酶标仪快速测定烟草中葡萄糖含量的方法，具体采用以下步骤： (1)样品前处理：将烟草或烟草制品置于烘箱中，40℃烘干至可用手指捻碎，取出用粉碎机研磨，过40目筛后得到烟末样品，取0.1g烟末样品于三角瓶中，加20mL水萃取样品中的葡萄糖，振荡30min后过滤得到滤液，作为待测样品溶液备用； (2)绘制标准工作曲线：准确配制浓度为5.55mmol/L的葡萄糖标液，分别移取该葡萄糖标液5、25、50、75、100和150μL置于2mL微量离心管中，在每个离心管中分别加入葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂盒(以下简称：试剂盒)中的试剂R1和R2各1000μL混匀，于37℃水浴显色15min后分别转移至96孔酶标板的不同位置，得到葡萄糖浓度分别为0.014、0.069、0.135、0.201、0.264、0.387mmol/L的标准工作液，以溶液的葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得到标准工作曲线方程：y＝2.941x+0.059，相关系数r2＝0.996； (3)分析方法：取待测样品溶液100μL置于2mL微量离心管中，分别加入试剂盒中的试剂R1和R2各1000μL混匀，于37℃水浴显色15min，转移至96孔酶标板中，以蒸馏水分析液为参比，用酶标仪于波长505nm处测定吸光度，由标准工作曲线推算出待测样品溶液的葡萄糖浓度； (4)结果计算：将待测样品溶液的葡萄糖浓度值代入公式(1)，计算待测样品的葡萄糖含量，并以两次平行测定的平均值作为最终的测定结果； P—待测样品中的葡萄糖含量，单位为百分比(％)； C待测—待测样品溶液的葡萄糖浓度，单位为毫摩尔每升(mmol/L)； VR1—试剂盒R1试剂的加入体积，单位为毫升(mL)； VR2—试剂盒R2试剂的加入体积，单位为毫升(mL)； V样品—待测样品溶液的加入体积，单位为毫升(mL)； V萃取—样品萃取剂的体积，单位为毫升(mL)； 0.18016—葡萄糖的物质的量，单位为克每毫摩尔(g/mmol)； m—待测样品质量，单位为克(g)； w—待测样品水份含量，单位为百分比(％)。
所属类别：	发明专利