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原文传递一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底及利用该基底检测酪氨酸酶活性的方法

专利名称：	一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底及利用该基底检测酪氨酸酶活性的方法
摘要：	本发明提供一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底及利用该基底检测酪氨酸酶活性的方法，利用三价铁离子与NTA形成螯合物Fe(NTA)，当体系中出现TYR时，催化氧化多巴胺变成多巴醌，多巴胺含量降低，抑制了Fe(NTA)DA络合物的形成，拉曼信号降低。利用AuPB@Au NPs做为拉曼增强基底，普鲁士蓝(PB)做为核壳结构中的内标信号分子，该分子只在生物静默区有强的谱峰，无背景信号干扰，可以用于校准检测过程中的信号波动，Fe(NTA)DA的拉曼特征峰1480cm‑1信号与普鲁士蓝2121cm‑1信号强度的比值(I1480/2121)与酪氨酸酶活性之间存在着良好的线性关系，检测限较低，可达0.0003U/mL。
专利类型：	发明专利
申请人：	福建师范大学
发明人：	陆德婵;陈彩柔;卢玉栋;黄祖芳;刘显鹏;沈慧英
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
申请号：	CN202010096667.1
公开号：	CN111157512A
代理机构：	福州科扬专利事务所
代理人：	李晓芬
分类号：	G01N21/65;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/65
申请人地址：	350300 福建省福州市福清市龙江街道校园新村一号福建师范大学研发中心
主权项：	1.一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于，由以下步方法制得：。 (1)AuPB@Au NPs的合成取10mL纳米金胶溶液，加入10-20μL浓度为0.1mol/L的普鲁士蓝(PB)溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@PB胶体；往10mL的制备好的Au@PB胶体中加入250μL浓度为6*10-2mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，重新分散于5mL超纯水中，得到AuPB@Au胶体； (2)Fe(NTA)溶液的合成首先取浓度为10-3M的九水硝酸铁溶液和浓度为10-3M的氨三乙酸三钠溶液按体积1:1混合后,往溶液中添加pH调节剂调节Fe(NTA)溶液的pH为7.0，混合液静置，得Fe(NTA)溶液； (3)AuPB@Au-Fe(NTA)SERS基底的合成将步骤(1)制备好的AuPB@Au胶体与步骤(2)制备的Fe(NTA)溶液按体积1:1混合后，搅拌混合后，离心洗涤除去未反应的Fe(NTA)，去除上清液，剩下AuPB@Au-Fe(NTA)胶体备用。 2.根据权利要求1所述一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于，所述纳米金胶溶液的制备方法如下：取100mL质量分数为0.01％的氯金酸溶液在磁力搅拌下加热至沸腾；然后取1-1.5mL质量分数为1％柠檬酸钠溶液，加入到沸腾的上述氯金酸溶液中，待沸腾15min后，反应结束，冷却至室温，制成纳米金溶胶。 3.根据权利要求1所述一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于：所述步骤(2)的pH调节剂为浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液。 4.根据权利要求1所述一种用于检测酪氨酸酶活性的SERS基底，其特征在于：步骤(3)的搅拌时间为至少30min。 5.一种利用权利要求1-4任一项制备的SERS基底检测酪氨酸酶的方法，其特征在于： S1、制备不同浓度的酪氨酸酶溶液标准溶液，加入多巴胺进行共培养，接着加入AuPB@Au-Fe(NTA)SERS基底混匀后，进行拉曼检测；记录Fe(NTA)DA的拉曼特征峰1480cm-1信号与普鲁士蓝2121cm-1信号强度的比值(I1480/2121)为纵坐标，酪氨酸酶活性为横坐标作出相对应的工作曲线； S2、检测待测样品中酪氨酸酶的回收率(％)：将所述步骤S1中所述酪氨酸酶的标准溶液替换为待测样品的溶液，按照所述步骤S1所述方法检测所述待测样品，对照工作曲线，计算得出细胞裂解液中酪氨酸酶的回收率。 6.根据权利要求5所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述工作曲线为Y＝0.163Log[C]+4.414,其中Y为I1480/2121；C为酪氨酸酶的浓度。 7.根据权利要求6所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述酪氨酸酶的最低检测限0.0003U/mL。 8.根据权利要求7所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述步骤S1中所述底物多巴胺的浓度为10-3M，多巴胺与酪氨酸酶的体积比为10:1，共培养时间为3min。 9.根据权利要求8所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述步骤S2中检测待测样品为Hela细胞裂解液。
所属类别：	发明专利