专利名称: |
测定血浆中苦杏仁苷、柚皮素、槲皮素浓度的HPLC-MS/MS方法 |
摘要: |
本发明公开了一种测定血浆中苦杏仁苷、柚皮素、槲皮素浓度的HPLC‑MS/MS方法,包括以下步骤:储备液的制备;将各储备液稀释成苦杏仁苷工作液、柚皮素工作液、槲皮素工作液和柳胺酚工作液;校正标准品的制备:取空白血浆,将所述苦杏仁苷工作液、柚皮素工作液、槲皮素工作液加入到所述空白血浆中,获得校正标准品;控样品的制备:取空白血浆,将所述苦杏仁苷工作液、柚皮素工作液、槲皮素工作液加入到所述空白血浆中,获得质控样品;样品的检测分析。本发明所述的方法,具有快捷性、灵敏度高、精密度和准确度良好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应的优点。 |
专利类型: |
发明专利 |
申请人: |
安领生物医药(苏州)有限公司 |
发明人: |
王樱桃;滕馨莹 |
专利状态: |
有效 |
申请日期: |
1900-01-20T00:00:00+0805 |
发布日期: |
1900-01-20T00:00:00+0805 |
申请号: |
CN201911412887.4 |
公开号: |
CN111208218A |
代理机构: |
苏州隆恒知识产权代理事务所(普通合伙) |
代理人: |
周子轶 |
分类号: |
G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72 |
申请人地址: |
215000 江苏省苏州市工业园区金鸡湖大道99号11栋504室 |
主权项: |
1.一种测定血浆中苦杏仁苷、柚皮素、槲皮素浓度的HPLC-MS/MS方法,其特征在于,所述方法中采用柳胺酚作为内标,所述方法包括以下步骤: 储备液的制备:用HPLC甲醇作为溶剂,配置得到苦杏仁苷储备液、柚皮素储备液、槲皮素储备液以及柳胺酚储备液; 工作液的制备:用HPLC甲醇和水作为溶剂,将所述苦杏仁苷储备液、柚皮素储备液、槲皮素储备液分别配置,获得苦杏仁苷工作液、柚皮素工作液、槲皮素工作液;用HPLC甲醇作为溶剂,将所述柳胺酚储备液制备成柳胺酚工作液,所述柳胺酚工作液中的柳胺酚浓度为50ng/mL; 校正标准品的制备:取空白血浆,将所述苦杏仁苷工作液、柚皮素工作液、槲皮素工作液加入到所述空白血浆中,获得校正标准品; 质控样品的制备:取空白血浆,将所述苦杏仁苷工作液、柚皮素工作液、槲皮素工作液加入到所述空白血浆中,获得质控样品; 样品的检测分析:取96孔板,在所述96孔板上做标示,并向各个样品孔内加入对应的样品;向对应的样品中相应地加入柳胺酚工作液或HPLC甲醇以进行蛋白沉淀;对蛋白沉淀后的各样品进行离心作用,并分别提取上清液;将各上清液进行稀释,然后进样分析。 2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法中,液相色谱参数如下: 色谱柱:Inertstain AQ-C18 2.1*50mm,5μm,柱温为40℃; 流动相:所述流动相的体积为500μL,包括流动相A和流动相B,所述流动相A为:乙酸体积分数为0.2%的乙酸水溶液,所述流动相B为:乙酸体积分数为0.2%的乙酸甲醇溶液; 质谱条件:采用电喷雾离子原,负离子检测,选择多反应监测工作方式进行一/二级质谱分析,质谱检测工作参数如下:苦杏仁苷的母离子/特征子离子的检测离子对为456.2/323.1,柚皮素的母离子/特征子离子的检测离子对为271.1/151.2,槲皮素的母离子/特征子离子的检测离子对为301.1/151.1,柳胺酚的母离子/特征子离子的检测离子对为228.1/210.0。 3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,流动相梯度洗脱条件为:第0.01~0.1min,所述流动相A的体积分数为85%;第0.5min,所述流动相A的体积分数为60%;第1min,所述流动相A的体积分数为20%;第2~3min,所述流动相A的体积分数为0;第3.01~3.40min,所述流动相A的体积分数为50%;第3.41~4.50min,所述流动相A的体积分数为0;第4.51~5.80min,所述流动相A的体积分数为85%。 4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述苦杏仁苷工作液、柚皮素工作液、槲皮素工作液中,苦杏仁苷、柚皮素、槲皮素的浓度分别介于100ng/mL~100000ng/mL之间。 5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述校正标准品中,所述苦杏仁苷、柚皮素和槲皮素的浓度分别介于5.0~5000ng/mL之间。 6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述质控样品中,所述苦杏仁苷、柚皮素和槲皮素的浓度分别介于5.0~3750ng/mL之间。 7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,对蛋白沉淀后的各样品进行离心作用的条件包括:在10℃,4000rpm条件下离心10min。 8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述空白血浆为比格犬血浆。 |
所属类别: |
发明专利 |