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原文传递测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC-MS/MS方法

专利名称：	测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC-MS/MS方法
摘要：	本发明公开了一种测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC‑MS/MS方法，包括：储备液的制备；将储备液稀释成硫酸氢氯吡格雷工作液、CCAM工作液和内标工作液；正标准品的制备：取空白血浆，将所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血浆中，获得校正标准品；质控样品的制备：取空白血浆，将所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血浆中，获得质控样品；样品的检测分析。本发明所提供的方法，具有提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应、快捷性、灵敏度高、精密度和准确度良好等优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	安领生物医药(苏州)有限公司
发明人：	王樱桃;胡玲华
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911420883.0
公开号：	CN111208219A
代理机构：	苏州隆恒知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	周子轶
分类号：	G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72
申请人地址：	215000 江苏省苏州市工业园区金鸡湖大道99号11栋504室
主权项：	1.一种测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC-MS/MS方法，其特征在于，所述方法中采用氯雷他定和卡马西平-d8作为内标，所述方法包括以下步骤：储备液的制备：用HPLC甲醇作为溶剂，分别将硫酸氢氯吡格雷、CCAM和氯雷他定加入HPLC甲醇中，配置得到硫酸氢氯吡格雷储备液、CCAM储备液以及氯雷他定储备液；工作液的制备：用HPLC甲醇和水作为溶剂，将所述硫酸氢氯吡格雷储备液和所述CCAM储备液分别稀释，获得硫酸氢氯吡格雷工作液、CCAM工作液；用乙腈作为溶剂，将所述氯雷他定储备液和卡马西平-d8加入所述乙腈溶剂中，获得内标工作液；校正标准品的制备：取空白血浆，将所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血浆中，获得校正标准品；质控样品的制备：取空白血浆，将所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血浆中，获得质控样品；样品的检测分析：取96孔板，在所述96孔板上做标示，并向各个样品孔内加入对应的样品；向对应的样品中相应地加入所述内标工作液或乙腈以进行蛋白沉淀；对蛋白沉淀后的各样品进行离心作用，并分别提取上清液；在30℃下采用氮气将各上清液吹干，再向各上清液中加入复溶液；封板、涡旋均匀，然后进样分析。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复溶液为乙腈体积分数为25％的乙腈水溶液。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标工作液中，所述氯雷他定的浓度为20ng/mL，所述卡马西平-d8的浓度为4ng/mL。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，液相色谱参数如下：色谱柱：Xbridge C18 2.1*50mm，3.5μm，柱温为35℃；流动相：包括流动相A和流动相B，所述流动相A为：甲酸体积分数为0.1％的甲酸水溶液，所述流动相B为：甲酸体积分数为0.1％的甲酸乙腈溶液；质谱条件：采用电喷雾离子原，正离子检测，选择多反应监测工作方式进行一/二级质谱分析，质谱检测工作参数如下：硫酸氢氯吡格雷的母离子/特征子离子的检测离子对为322.1/212.2，CCAM的母离子/特征子离子的检测离子对为308.2/198.2，氯雷他定的母离子/特征子离子的检测离子对为383.2/337.1，卡马西平-d8的母离子/特征子离子的检测离子对为237.1/194.1。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，流动相梯度洗脱条件为：第0.01～0.2min，所述流动相A的体积分数为80％；第0.8～1.00min，所述流动相A的体积分数为40％；第1.80～2.50min，所述流动相A的体积分数为0％；第2.51～2.70min，所述流动相A的体积分数为80％；第2.71～3.30～min，所述流动相A的体积分数为0％；第3.31～4.60min，所述流动相A的体积分数为80％。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对蛋白沉淀后的各样品进行离心作用的条件包括：在10℃，4000rpm条件下离心15min。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液中，所述硫酸氢氯吡格雷和所述CCAM的浓度分别介于20～20000ng/mL之间。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述校正标准品中，所述硫酸氢氯吡格雷和所述CCAM的浓度分别介于1.00～1000ng/mL之间。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质控样品中，硫酸氢氯吡格雷和所述CCAM的浓度分别介于1～750ng/mL之间。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述空白血浆为食蟹猴血浆。
所属类别：	发明专利