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原文传递一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条、其制备方法及其检测方法

专利名称：	一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条、其制备方法及其检测方法
摘要：	本发明提供一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，所述桶装胶体金微孔试纸条包括胶体金微孔和检测试纸条；所述胶体金微孔包被有辣椒素单克隆抗体；所述检测试纸条上依次设置有样品垫、包被辣椒素完全抗原的T线、包被羊抗鼠二抗的C线和吸水垫。本发明所述桶装胶体金微孔试纸条的特异性强、灵敏度高、性能稳定、操作简便、检测结果肉眼可判，其可用于地沟油的快速鉴定，为食品安全市场监管人员提供了便利，为人民群众的健康提供了有力保障。
专利类型：	发明专利
申请人：	武汉华美维士康生物工程有限公司
发明人：	杨浩;闫彩霞;吴慧;余箭翔;华权高;田国军
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010050840.4
公开号：	CN111208296A
代理机构：	北京众达德权知识产权代理有限公司
代理人：	刘杰
分类号：	G01N33/577;G01N33/558;G01N33/53;C07K14/765;G;C;G01;C07;G01N;C07K;G01N33;C07K14;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/53;C07K14/765
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城创新园B6栋D005
主权项：	1.一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，所述桶装胶体金微孔试纸条包括胶体金微孔和检测试纸条；所述胶体金微孔包被有辣椒素单克隆抗体；所述检测试纸条上依次设置有样品垫、包被辣椒素完全抗原的T线、包被羊抗鼠二抗的C线和吸水垫。 2.根据权利要求1所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，其特征在于，所述辣椒素完全抗原的制备方法包括以下步骤： (1)将香兰素胺盐酸盐0.8-1mmol、四氢呋喃5-7ml和三乙胺10-15mmol混合，在室温下搅拌30-40min； (2)将步骤(1)得到的混合物与丁二酸酐1-2mmol混合，在室温下搅拌4-6h；优选地，将步骤(1)得到的混合物与丁二酸酐1-2mmol混合，在室温下搅拌4-6h至TLC监测原料点消失； (3)将步骤(2)得到的混合物与水10-12mL、乙酸乙酯8-10mL混合，在室温下搅拌3-5min； (4)将步骤(3)得到的混合物与饱和碳酸氢钠5-7mL混合，搅拌均匀，分液，后将水相的pH调至2-3； (5)将步骤(4)得到的混合物用乙酸乙酯8-10mL萃取2～3次，合并得到的乙酸乙酯相，干燥，后用3-4mL甲醇进行重结晶，得到如式I所示的辣椒素半抗原；其中所述辣椒素半抗原的分子式为C12H15NO5，相对分子量为253.2； (6)将步骤(5)得到的辣椒素半抗原0.1-0.15mmol与DMF 200-300μL、三正丁胺0.1-0.2mmol、氯甲酸异丁酯0.1-0.2mmol混合，震荡1-2h； (7)将步骤(6)得到的混合物与牛血清白蛋白混合，在室温下搅拌4-6h，后置于浓度为0.01M的磷酸盐缓冲液中透析，收集透析液，得到如式II所示的辣椒素完全抗原；优选地，每12h更换一次所述磷酸盐缓冲液；优选地，所述牛血清白蛋白的浓度为5-6mg/ml；优选地，所述辣椒素半抗原与所述牛血清白蛋白的偶联比为60～70:1；优选地，所述透析温度为4～8℃；优选地，所述透析时间为2～3天； 3.根据权利要求1所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，其特征在于，所述胶体金微孔的制备方法包括： (1)将加热至沸腾的质量分数为0.02％的氯金酸水溶液与质量体积比为10％的柠檬酸三钠溶液混合，继续煮沸，冷却后得到胶体金溶液；优选地，所述氯金酸与所述柠檬酸三钠的质量比为1:1.2； (2)向步骤(1)得到的胶体金溶液中添加0.1mol/L的K2CO3溶液至pH为6.0～6.5； (3)将步骤(2)得到的溶液与辣椒素单克隆抗体的稀释液混合，反应20～30min；后添加质量分数为1～2％的牛血清白蛋白溶液进行封闭，离心，弃去上清液，取沉淀物；其中，所述步骤(2)得到的溶液与所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的体积比为25:2；所述牛血清白蛋白与所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的体积比为5:4；所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的制备方法为：将辣椒素单克隆抗体与水混合至浓度为8-10μg/mL；优选地，所述辣椒素单克隆抗体的浓度为6.0mg/mL； (4)将步骤(3)得到的沉淀物与浓度为0.2mol/L的硼酸盐缓冲液混合，得到混合物，将该混合物添加至微孔中，冻干，得到胶体金微孔；优选地，所述步骤(3)得到的沉淀物与所述硼酸盐缓冲液的体积比为1:8～10；优选地，所述硼酸盐缓冲液的pH为8.5～9；优选地，将所述胶体金微孔于温度为2～8℃下保存，优选地，将所述胶体金微孔于温度为4℃下保存；优选地，所述步骤(4)中的冻干程序依次为：在温度为-50℃下保持4-6h；在温度为-25℃下保持4-6h；在温度为-15℃下保持4-6h；在温度为5℃下保持4-6h；在温度为25℃下保持6-8h。 4.根据权利要求1所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，其特征在于，所述样品垫的制备方法为：将玻璃纤维垫浸泡于0.04-0.06mol/L的磷酸缓冲液中，后晾干；其中所述磷酸缓冲液含有体积分数为0.3～0.5％的曲拉通X-100。 5.根据权利要求1所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，其特征在于，所述检测试纸条为硝酸纤维素膜；优选地，所述吸水垫为吸水性材料。 6.根据权利要求1所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，其特征在于，所述包被辣椒素完全抗原的T线的划线方法为：将所述辣椒素完全抗原与水混合至浓度为5～6mg/ml的辣椒素完全抗原溶液；将得到的辣椒素完全抗原溶液与磷酸盐缓冲液混合，得到T线包被溶液；将得到的T线包被溶液在所述检测试纸条上划膜，后置于温度为50～60℃下烘烤12～18h；其中，所述T线包被溶液的浓度为1-1.5mg/ml；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.03mol/L，优选0.02mg/ml；所述磷酸盐缓冲液中含有质量分数为0.5～1％的海藻糖。 7.根据权利要求1所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，其特征在于，所述包被羊抗鼠二抗的C线的划线方法为：将所述羊抗鼠二抗与磷酸盐缓冲液混合，得到C线包被溶液；将得到的C线包被溶液在所述检测试纸条上划膜，后置于温度为50～60℃下烘烤12～18h；其中，所述羊抗鼠二抗的浓度为12.5～14.5mg/ml；优选13.7mg/ml；所述C线包被溶液的浓度为1-1.5mg/ml；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.03mol/L，优选0.02mg/ml；所述磷酸盐缓冲液中含有质量分数为0.5～1％的海藻糖。 8.一种使用根据权利要求1至7中任一项所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤： (1)将食用油样本与水基试剂混合，离心后取水相溶液；将得到的水相溶液与磷酸氢二钠-柠檬酸稀释液混合，得到待测样本处理液；其中，所述水基试剂为含有5-10％NaCl的0.1-0.2mol/L NaOH溶液；所述磷酸氢二钠-柠檬酸稀释液的浓度为0.05～0.15mol/L； (2)将所述待测样本处理液置于所述胶体金微孔中，静置；后将所述检测试纸条上的所述样品垫部分浸入所述胶体金微孔中，静置，观察T线和C线。 9.根据权利要求8所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤： (1)将食用油样本与水基试剂混合，离心，取水相溶液；后将所述水相溶液与磷酸氢二钠-柠檬酸稀释液混合，得到待测样本处理液；其中，所述食用油样本与所述水基试剂的体积比为1:0.5；所述水基试剂为含有5-10％NaCl的0.1-0.2mol/L NaOH溶液；所述水相溶液与所述磷酸氢二钠-柠檬酸稀释液的体积比为2:1；所述磷酸氢二钠-柠檬酸稀释液的pH为5.0-5.5；所述磷酸氢二钠-柠檬酸稀释液的浓度为0.1mol/L； (2)将所述待测样本处理液置于所述胶体金微孔中，静置3～5min，后将所述检测试纸条上的所述样品垫部分浸入所述胶体金微孔中，静置5～10min后取出。 10.根据权利要求1至7中任一项所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条以及使用根据权利要求1至7中任一项所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条的检测方法在检测食用油中辣椒素中的应用。
所属类别：	发明专利