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原文传递一种定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法及试剂盒

专利名称：	一种定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法及试剂盒
摘要：	本发明涉及一种用于定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法及试剂盒。本发明采用一种胶乳增强竞争比浊的方法，即通过待测样本中抗环瓜氨酸多肽抗体与试剂中包被抗体的胶乳微球竞争结合试剂中环胍氨酸多肽，在500～700nm波长分光光度法测定其吸光度值，根据吸光度值衰减量计算待测样本中抗环胍氨酸抗体浓度值。采用该方法测定抗环胍氨酸抗体的线性范围可达到7～500U/L。且不受类风湿等干扰，试剂检测性能可达到ELISA和电化学发光免疫分析法一致。本发明的方法的检测试剂盒灵敏度高，特异性好，适用于临床化学分析仪，同时大大降低了检测成本。
专利类型：	发明专利
申请人：	叶卫玲
发明人：	不公告发明人
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010051493.7
公开号：	CN111208303A
代理机构：	北京君智知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	郑明
分类号：	G01N33/68;G01N33/543;G01N33/546;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/543;G01N33/546
申请人地址：	310018 浙江省杭州市杭州经济技术开发区27号路朗诗国际街区2-2-202
主权项：	1.一种定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法，其特征在于该方法采用的是待测样本与检测试剂1混合后，待测样本中抗环胍氨酸抗体与试剂1中环胍氨酸多肽或连接有载体的环胍氨酸多肽发生免疫复合反应，待加入试剂2后，其包被有抗环胍氨酸多肽抗体的胶乳微球与剩余环胍氨酸多肽或连接有载体的环胍氨酸多肽发生免疫复合反应而使胶乳微球聚集形成浊度，在500～700nm波长条件下，其吸光度值随待测样本中抗环胍氨酸抗体浓度值升高而降低，根据其吸光度值降低多少可计算出待测样本中抗环胍氨酸抗体浓度。 2.如权利要求1所述环胍氨酸多肽抗体的检测方法，其特征在于将所述的试剂1和试剂2装配成定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测试剂盒，其中：试剂1的配方为：缓冲液1～100mM，增浊剂0.01％～5％，中性盐0.1％～1％，稳定剂1％～20％，CCP-载体0.01％～1％，防腐剂0.01％；试剂2的配方为：缓冲液1～100mM，中性盐0.1％～1.0％，稳定剂1％～-20％，抗-CCP抗体包被微球0.1％～-0.4％，防腐剂0.01％。 3.如权利要求1-2所述环胍氨酸多肽抗体的检测方法，其特征在于所述的试剂1中采用了环胍氨酸多肽或连接有载体的环胍氨酸多肽；所述连接有载体的环胍氨酸多肽(CCP-载体)，其载体主要采用各种蛋白、多肽、聚丙烯酸、聚乙二醇(PEG)，聚吡咯烷酮(PVP)和聚苯乙烯微球；所述蛋白主要包括牛血清白蛋白(BSA)，血蓝蛋白(KLH)，鸡血清白蛋白，猪血清白蛋白，马血清白蛋白，铜蓝蛋白和其他一切可作为载体的蛋白；优先牛血清白蛋白；所述多肽主要包括聚赖氨酸，聚谷氨酸和其他聚氨基酸；优选聚赖氨酸；所述聚丙烯酸主要包括分子量从1000～4000000的聚丙烯酸和分子量1000～4000000的马来酸-丙烯酸聚合物；优选聚丙烯酸120000；所述聚乙二醇(PEG)，主要包括分子量1000～300000的PEG；所述聚吡咯烷酮(PVP)，主要包括分子量1000～60000的PVP；所述聚苯乙烯微球，主要包括羧基聚苯乙烯微球，氨基聚苯乙烯微球，苯乙烯微球，羟基聚苯乙烯微球等，但不限于上述所述聚苯乙烯微球，其微球粒径大小主要包括60-400nm；所述环胍氨酸多肽与载体的连接方式，主要采用共价藕联或生物素-链霉亲和素标记的方式。 4.如权利要求1-2所述如权利要求1所述一种定量检测抗环胍氨酸多肽抗体的检测方法，其特征在于所述的试剂2采用抗环胍氨酸抗体包被的胶乳微球；所述的胶乳微球，主要包括聚苯乙烯微球，羧基聚苯乙烯微球，羟基聚苯乙烯微球和氨基聚苯乙烯微球；优先羧基聚苯乙烯微球；所述胶乳微球主要采用粒径大小在60～400nm，优选120nm和200nm；所述包被胶乳微球的抗体，主要来源有羊抗环胍氨酸多肽抗体，兔抗环胍氨酸多肽抗体，鼠抗环胍氨酸多肽抗体，也可采用人抗环瓜氨酸多肽抗体和其他动物免疫获得的抗环胍氨酸多肽抗体，优先兔抗环胍氨酸多肽抗体。 5.如权利要求1-2所述的抗环胍氨酸抗体的检测方法，其特征在于试剂1和试剂2中：所述缓冲液，主要包括PB，Tris，Good’S，双甘肽，甘氨酸，枸橼酸等缓冲液，优选Good’S缓冲液；所述中性盐，主要包括硫酸铵，氯化钠，氯化钾等，优选氯化钠；所述增浊剂，主要包括PEG4000～200000,PVP4000-60000，优选PEG-8000；所述防腐剂，主要包括Proclin系列，叠氮钠和抗生素，优选叠氮钠；所述稳定剂，主要包括蔗糖，海藻糖和牛血清白蛋白等，优选蔗糖。
所属类别：	发明专利