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原文传递一种硒单糖的酶催化检出方法

专利名称：	一种硒单糖的酶催化检出方法
摘要：	本发明涉及一种细胞色素P450单加氧酶(CYP236A20)、铁氧化还原蛋白(FoX)、铁氧还蛋白还原酶(FoR)和四甲基联苯胺(TMBred)在检测硒单糖或制备硒单糖检出试剂中的应用，被检测的硒单糖为1β‑甲基硒‑2‑N‑乙酰基‑D‑半乳糖胺(GalNAc1SeMe)，其为人体尿液中的代谢排出物。本发明还提供了该硒单糖的新检出方法，即以CYP236A20作为催化剂和底物的受体，以FoX和FoR为电子传递媒介，以还原型TMBred为质子供体和显色剂；利用酶与待测物中甲基硒官能团的识别，将该配基脱去，该过程伴随四甲基联苯胺的氧化(TMBox)，使溶液颜色由无色透明向蓝紫色转变，从而实现该硒单糖的灵敏指示。
专利类型：	发明专利
申请人：	迈科若(苏州)医疗科技有限公司
发明人：	邓盛元;王丽娟;黄洁;吴希;郭睿;李臻怡;宋美燕;王健;郭仁妹
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T20:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010106879.3
公开号：	CN111198185A
代理机构：	苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	李娅
分类号：	G01N21/78;G01N21/31;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/78;G01N21/31
申请人地址：	215000 江苏省苏州市相城区高铁新城南天成路88号天成信息大厦501-E06工位(集群登记)
主权项：	1.细胞色素P450单加氧酶、铁氧化还原蛋白、铁氧还蛋白还原酶和还原型四甲基联苯胺在检测硒单糖或制备硒单糖检出试剂中的应用，所述硒单糖为1β-甲基硒-2-N-乙酰基-D-半乳糖胺。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述细胞色素P450单加氧酶由大肠杆菌(Escherichia coli)重组表达，源于NCBI序列号为WP_038530297.1的细菌Formosaagariphila，细胞色素P450单加氧酶代号为CYP236A20。 3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述CYP236A20、铁氧化还原蛋白、铁氧还蛋白还原酶和还原型四甲基联苯胺的浓度比为0.01～1.0:1.0～90.0:0.2～18.0:250～3000。 4.一种硒单糖的酶催化检出方法，所述硒单糖为1β-甲基硒-2-N-乙酰基-D-半乳糖胺，其特征在于，包括以下步骤：提供含有细胞色素P450单加氧酶、铁氧化还原蛋白和铁氧还蛋白还原酶的待测溶液；向待测溶液中加入还原型四甲基联苯胺溶液，根据待测溶液的颜色变化判断待测溶液中是否含有所述硒单糖。 5.根据权利要求4所述的检出方法，其特征在于：所述含有细胞色素P450单加氧酶来源于细菌Formosa agariphila，细菌Formosa agariphila的NCBI序列号为WP_038530297.1，代号CYP236A20；所述待测溶液中CYP236A20的浓度为0.01～1.0μM。 6.根据权利要求4所述的检出方法，其特征在于：所述待测溶液中铁氧化还原蛋白的浓度为1.0～90.0μM。 7.根据权利要求4所述的检出方法，其特征在于：所述待测溶液中铁氧还蛋白还原酶的浓度为0.2～18.0μM。 8.根据权利要求4所述的检出方法，其特征在于：所述待测溶液中还原型四甲基联苯胺的浓度为0.25～3.0mM。 9.根据权利要求4所述的检出方法，其特征在于：所述待测溶液的pH值为7.0～8.0。 10.一种1β-甲基硒-2-N-乙酰基-D-半乳糖胺的指示剂，其特征在于，包括细胞色素P450单加氧酶、铁氧化还原蛋白、铁氧还蛋白还原酶和还原型四甲基联苯胺。
所属类别：	发明专利