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原文传递鸭坦布苏病毒胶体金快速检测试纸及其制备方法

专利名称：	鸭坦布苏病毒胶体金快速检测试纸及其制备方法
摘要：	一种家禽防疫用品及制作方法，即一种鸭坦布苏病毒胶体金快速检测试纸及其制备方法，所述试纸包括底板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜及吸水垫，样品垫贴在PVC底板的一端，吸水垫贴于另一端，硝酸纤维膜贴于底板中部，硝酸纤维膜一端与胶体金垫相连，另一端与吸水垫连接，胶体金垫与样品垫相连，E蛋白单克隆抗体用胶体金包被结合于胶体金垫上，鼠抗E蛋白多抗包被于硝酸纤维膜的划线处作为检测线，羊抗鼠IgG作为二抗包被于质控线的位置。有益效果是：胶体金灵敏度高，试纸特异性强，仅对坦布苏病毒显示阳性，可快速识别坦布苏病毒，可对初期症状进行鉴别，也可用于普通鸭群的筛查，可大幅缩短检测时间，使该病及早发现，将养殖户的损失降为最低。
专利类型：	发明专利
申请人：	内蒙古民族大学
发明人：	王学理;张玲艳;宋丽丽;贾伟娟
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T06:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T22:00:00+0805
申请号：	CN202010152368.5
公开号：	CN111190011A
代理机构：	北京市商泰律师事务所
代理人：	邹芳德
分类号：	G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
申请人地址：	028000 内蒙古自治区通辽市科尔沁区西拉木伦大街996号
主权项：	1.一种鸭坦布苏病毒胶体金快速检测试纸，其特征在于：所述试纸包括底板（1）、样品垫（5）、胶体金垫（6）、硝酸纤维膜（2）及吸水垫（7），样品垫（5）粘贴在PVC底板（1）的一端，吸水垫（7）粘贴于底板（1）的另一端，硝酸纤维膜（2）粘贴于底板（1）的中部，硝酸纤维膜（2）一端与胶体金垫（6）相连，胶体金垫（6）与样品垫相连，另一端与吸水垫（7）连接，将E蛋白单克隆抗体作为金标探针用胶体金进行包被结合于胶体金垫（6）上，再将鼠抗E蛋白多抗1:1稀释包被于硝酸纤维膜（2）的划线处作为检测线（3），羊抗鼠IgG做相同处理后作为二抗包被于质控线（4）的位置。 2.根据权利要求1所述鸭坦布苏病毒胶体金快速检测试纸的制备方法：其特征在于：以鸭坦布苏病毒DTMUV的囊膜蛋白E蛋白为核心蛋白，设计E蛋白引物，上游引物序列F为5/-TTAGGATCCTTCAGCTGTCTGGGGATG-3/（划线处为BamHⅠ酶切位点），下游引物序列R为5/-TGAGAGCTCGGCATTGACATTTACTGC-3/（划线处为SacⅠ酶切位点），进行E蛋白的克隆表达：所克隆基因片段大小为1500bp，表达蛋白大小为63ku；采用尿素梯度离心法对E蛋白进行分离纯化，纯化蛋白的浓度为4.98mg/ml；用E蛋白（100ug）三次免疫BALB/c小鼠，之后用间接ELISA法筛选出血清效价高于1:5000的小鼠进行四次免疫；提取上述小鼠脾细胞与SP2/O细胞进行融合，筛选出A1B3与B2C8两株稳定细胞；通过柠檬酸三钠还原法制备大小为25nm的酒红色胶体金溶液，胶体金溶液pH为8，将分离所得E蛋白单克隆抗体用透析袋处理法进行除盐，再用倍比稀释法测得抗体最佳标记浓度为1:8，将按上述条件优化后的金标探针包被于胶体金垫上，再将鼠抗E蛋白多抗1:1稀释包被于硝酸纤维膜检测线处，羊抗鼠IgG做相同处理后作为二抗包被于质控线，之后将底板、胶体金垫、硝酸纤维膜、样品垫、吸水垫进行组装，建成胶体金检测试纸。 3.根据权利要求1或2所述鸭坦布苏病毒胶体金快速检测试纸的使用方法，其特征在于：将检测物置于样品垫上，样品在毛细作用下向前泳动，如样品中含有目标抗原，则会与胶体金垫上的特异性抗体结合形成复合物，之后该复合物继续向前移动，当复合物移至检测线处时抗原又与检测线上的抗体进行特异性结合，金标抗体集聚于检测线处显示出红色，剩余未能与检测线上抗体结合的金标抗体继续向前泳动，当其达到质控线后与此处二抗进行特异性结合并在此处集聚进而显现颜色；当检测线与质控线均显色时表明检测物内含有目标抗原且该检测试纸功能正常，检测呈阳性；而当仅质控线显色时则仅表明检测试纸功能正常但检测物内无目标抗原，呈阴性；检测线颜色的深浅程度则表示目标检测物含量的多少。
所属类别：	发明专利