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原文传递一种辣椒素类物质的电化学免疫传感器检测方法及应用

专利名称：	一种辣椒素类物质的电化学免疫传感器检测方法及应用
摘要：	一种辣椒素类物质的电化学免疫传感器检测方法及应用，涉及一种新的检测血清的生物传感器制备方法。本发明分别利用电沉积和滴涂技术的方式将普鲁士蓝‑纳米金、硫堇和辣椒素类物质抗体依次修饰在玻碳电极表面。包括以下步骤：普鲁士蓝用含一定浓度醋酸的壳聚糖充分溶解，然后加入一定量金纳米粒子充分混匀制备沉积液；经过电流‑时间电化学处理技术将混合溶液电沉积在电极表面；另外，在修饰好的电极表面滴加硫堇，可以加快电子传递速率的同时增强电极的稳定性从而提高传感器电信号。本发明免疫传感器稳定性好、选择性优、灵敏度高，可用于血清样品中辣椒素类物质的快速检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	山东理工大学
发明人：	杨青青;赵庆雪;孙霞;郭业民;张妍妍
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T09:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010154907.9
公开号：	CN111208181A
分类号：	G01N27/30;G01N27/327;G01N27/416;G01N33/53;G01N33/543;G;G01;G01N;G01N27;G01N33;G01N27/30;G01N27/327;G01N27/416;G01N33/53;G01N33/543
申请人地址：	255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室
主权项：	1. 一种辣椒素类物质的电化学免疫传感器，其特征在于，通过将普鲁士蓝-纳米金和硫堇先后分别以电沉积和滴涂的方式修饰在玻碳电极表面来增强电极的导电性和固定辣椒素类物质抗体，后用BSA封闭非特异性位点，实现传感器的构建，包括如下步骤（1）玻碳电极预处理：首先将裸玻碳电极在0.3 μm氧化铝泥浆中进行抛光至镜面，然后将其先后在超纯水和无水乙醇中分别超声1分钟并用氮气吹干，最后将玻碳电极在浓度为5mM铁氰化钾溶液中，用循环伏安法测定其电位差小于80 mV，4℃保存，备用（2）制备修饰电极：首先将普鲁士蓝-纳米金复合材料通过电沉积的方式固定在电极表面，后将制备好的硫堇溶液滴涂在电极表面，室温干燥，制得修饰电极（3）固定抗体：将步骤（2）制得的电极浸入适合浓度的辣椒素类物质抗体溶液中，4℃孵育过夜，使辣椒素类物质抗体固定在硫堇/普鲁士蓝-纳米金复合材料层（3）滴涂BSA封闭液以封闭电极表面非特异性结合位点，冲洗并吹干，制得所述辣椒素类物质的电化学免疫传感器。 2.根据权利要求1所述的一种辣椒素类物质的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括一下步骤（1）普鲁士蓝-纳米金复合材料的制备首先将50mL 0.01 wt% 四氯金酸溶液在磁性搅拌机搅拌下加热至沸点，然后迅速加入2.5 mL 1wt %的柠檬酸钠溶液，当混合物变成深红色时，继续大力搅拌，煮沸15分钟，然后继续搅拌，冷却至室温，4℃避光存放；称取 0.1 g壳聚糖，溶于200 mL 1.0%乙酸溶液中，室温下搅拌3小时，使壳聚糖完全溶解后，将0.0625g FeCl3、0.0822g K3[Fe(CN)6]、0.7455gKCl和1 mL浓盐酸分别加入上述壳聚糖溶液100 mL中，超声分散至得到深绿色分散体；最后向混合溶液中加入1 mL制备好的纳米金，并用超声波在室温下分散0.5小时，直至完全溶解，即可得到普鲁士蓝-纳米金复合材料硫堇溶液的制备首先称取100 mg硫堇粉末，将其放入烧杯中，然后加入超纯水搅拌溶解定容至25 mL，得到4 mg/mL的硫堇溶液辣椒素类物质电化学免疫传感器的制备首先，将预处理好的玻碳电极浸入普鲁士蓝-纳米金复合材料溶液中，通过电沉积的方式使其固定在电极表面，然后，在普鲁士蓝-纳米金复合材料层滴加5 μL硫堇溶液，室温组装；将组装好的电极浸入1 mL 97.7 ng/mL辣椒素类物质抗体溶液中，4℃孵育过夜；用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗干净后，继续滴加5 μL质量分数为0.5%的BSA，室温封闭40分钟；将所得电极用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗干净，晾干，即可得到所制备的电化学免疫传感器。 3.根据权利要求1所述的辣椒素类物质电化学免疫传感方法，其特征在于，包括以下步骤（1）辣椒素类物质电化学免疫传感器的制备首先将50mL 0.01 wt% 四氯金酸溶液在磁性搅拌机搅拌下加热至沸点，然后迅速加入2.5 mL 1wt %的柠檬酸钠溶液，当混合物变成深红色时，继续大力搅拌，煮沸15分钟，然后继续搅拌，冷却至室温，4℃避光存放；称取 0.1 g壳聚糖，溶于200 mL 1.0%乙酸溶液中，室温下搅拌3小时，使壳聚糖完全溶解后，将0.0625g FeCl3、0.0822g K3[Fe(CN)6]、0.7455gKCl和1 mL浓盐酸分别加入上述壳聚糖溶液100 mL中，超声分散至得到深绿色分散体；最后向混合溶液中加入1 mL制备好的纳米金，并用超声波在室温下分散0.5小时，直至完全溶解，即可得到普鲁士蓝-纳米金复合材料；将预处理好的玻碳电极浸入普鲁士蓝-纳米金复合材料溶液中，通过电沉积的方式使其固定在电极表面；称取100毫克硫堇粉末，将其放入烧杯中，然后加入超纯水搅拌溶解定容至25 mL，得到4 mg/mL的硫堇溶液；在普鲁士蓝-纳米金复合材料层滴加5 μL硫堇溶液，室温组装；将组装好的电极浸入适合浓度的辣椒素类物质抗体溶液中，4℃孵育过夜；用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗干净后，继续滴加5 μL质量分数为0.5%的BSA，室温封闭40分钟；将所得电极用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗干净，晾干，即可得到所制备的电化学免疫传感器标准溶液中辣椒素类物质的检测向步骤（1）制备的辣椒素类物质电化学免疫传感器表面滴加5 μL不同浓度的辣椒素标准溶液，室温下温育反应40分钟后采用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗干净，在5 mM铁氰化钾溶液中，用差分脉冲伏安法记录电流响应值，从而检测出标准溶液中辣椒素类物质的含量。 4.如权利要求3所述的一种基于辣椒素类物质的电化学免疫传感器的所建立的电化学免疫传感方法在血清检测中应用，包括以下步骤取Balb/c小鼠血浆盛于离心管中，置于37℃环境中促其凝固，待血液凝固后离心（3000rpm/5min），得到血清样品，每个样品分别进行五个平行试验；向权利要求书2制备的辣椒素类物质电化学免疫传感器表面滴加5 μL不同浓度的辣椒素标准溶液，室温下温育反应40分钟后采用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗干净，在5 mM铁氰化钾溶液中，用差分脉冲伏安法记录电流响应值，从而检测出血清样品溶液中辣椒素类物质的含量。
所属类别：	发明专利