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一种石蜡包埋三维悬浮细胞团的免疫荧光染色方法
| 专利名称： | 一种石蜡包埋三维悬浮细胞团的免疫荧光染色方法 |
| 摘要： | 本发明涉及一种石蜡包埋三维悬浮细胞团的免疫荧光染色方法，该方法包括如下步骤：对三维悬浮细胞团进行预处理后，浸入石蜡液中包埋切片，进行抗原修复，再进行免疫荧光染色。本发明提供的方法细胞团内部细胞染色充分，结果准确，可以观察悬浮细胞团整体的蛋白表达和分布情况，且仅需要普通的荧光显微镜即可进行样本观察。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请人： | 东莞市东阳光生物药研发有限公司 |
| 发明人： | 宋益哲;李文佳;曹易照;欧镇生;粱德灿;李景秋;刘靖;凌伊;王慧;陈小锋 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 1900-01-20T13:00:00+0805 |
| 发布日期： | 1900-01-20T00:00:00+0805 |
| 申请号： | CN202010174436.8 |
| 公开号： | CN111207987A |
| 代理机构： | 北京睿阳联合知识产权代理有限公司 |
| 代理人： | 郭奥博;王莹 |
| 分类号： | G01N1/30;G01N33/533;G;G01;G01N;G01N1;G01N33;G01N1/30;G01N33/533 |
| 申请人地址： | 523871 广东省东莞市长安镇长安振安中路368号3号楼214室 |
| 主权项： | 1.一种石蜡包埋三维悬浮细胞团的免疫荧光染色方法，其特征在于，包括如下步骤：对三维悬浮细胞团进行预处理后，浸入石蜡液中包埋切片，进行抗原修复，再进行免疫荧光染色。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理包括依次进行的：固定、脱水以及透明。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述固定采用3～5％甲醛溶液，在室温固定0.5～1.5h。 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述脱水依次采用浓度为65～75％、85～95％、100％的乙醇逐级进行； 优选地，所述脱水包括：将固定后的细胞团在65～75％的乙醇中孵育4～6min，再在85～95％的乙醇中孵育至少一次，每次孵育4～6min，再在100％的乙醇中孵育至少一次，每次孵育4～6min。 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述透明包括：将脱水后的细胞团在二甲苯中进行至少一次孵育，每次孵育时间4～6min。 6.根据权利要求1～5任意一项所述的方法，其特征在于，切片后，将载有细胞团的玻片烘干，然后脱蜡复水。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述烘干为在40～45℃下烘干8～16h。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原修复采用的修复液为0.05～0.15M、pH8.8～9.2的EDTA溶液。 9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于，所述抗原修复包括如下步骤：将载有细胞团的玻片置于抗原修复液中，95～100℃加热15～25min，再快速置于0～4℃冷却5～15min。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞团是人胚胎干细胞细胞团，或是由人胚胎干细胞分化所得细胞的细胞团。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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