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原文传递基于液基细胞制片的单细胞制片方法

专利名称：	基于液基细胞制片的单细胞制片方法
摘要：	本发明公开了基于液基细胞制片的单细胞制片方法，包括以下步骤：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理。本发明通过设置液基样本处理、加入细胞保存处理液、沉淀、巴氏染色和离心制片的工艺流程，解决了目前的单细胞制片方法制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊，而且样本中常常残有很多的白细胞和红细胞，影响观察的问题，该基于液基细胞制片的单细胞制片方法，具备保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整，也能清除多余细胞的优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	苏州浚惠生物科技有限公司
发明人：	阎灼辉
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T18:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911312958.3
公开号：	CN111060368A
代理机构：	北京中政联科专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	刘静
分类号：	G01N1/28;G01N1/30;G;G01;G01N;G01N1;G01N1/28;G01N1/30
申请人地址：	200233 上海市徐汇区桂平路333号6号楼103室
主权项：	1.基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；步骤2：加入细胞保存处理液；将液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡；步骤3：沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；步骤4：巴氏染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入PH7.8tris缓冲液，置入苏木素染液，置入PH7.8tris缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入EA-OG混合染液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；步骤5：离心制片，将巴氏染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。 2.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，预处理包括液基样本整理、摆放、扫码。 3.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，37℃孵育的时间为8-12min，反应体系切换为生理盐水体系。 4.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水，冲洗时间为3-5min。 5.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤2中，细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、N-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份、脯氨酸3份。 6.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤2中，液基标本与细胞保存处理液加入的体积比为一比三。 7.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤3中，静置时间为3小时。 8.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤4中，置入无水乙醇或异丙醇10-12秒，置入PH7.8tris缓冲液5-8秒，置入苏木素染液3-6分钟，置入PH7.8tris缓冲液0.8-1.2分钟，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置入EA-OG混合染液2-4分钟，置入无水乙醇或异丙醇9-12秒，重复2遍，置于二甲苯8-12秒，重复2遍。 9.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤5中，离心机进行制片时，离心速度为800r/min，离心时间为6min。 10.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤5中，封片采用的封片试剂为紫外光固化胶。
所属类别：	发明专利