详情

原文传递一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法

专利名称：	一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法
摘要：	本发明涉及生物学鉴定技术领域，具体揭示了一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，包括制备已知性别的银杏成年植株组织提取液，分别用雌雄株的银杏成年植株组织提取液注射家兔进行免疫程序，提取家兔血液得到血清，然后将血清与相反性别的雌雄株的银杏成年植株组织充分混合，利用混合溶液离心后获得的雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清，在琼脂扩散凝集试验中鉴定得到待检测的银杏幼苗的性别；相比目前的多种鉴定方法，操作难度小，简便易行，且较少使用价格昂贵或毒性大的药品，而且容易量产。
专利类型：	发明专利
申请人：	南京禾稼春生物科技有限公司
发明人：	汪良驹;郝麒;汪文韬;曲咏梅
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T23:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T05:00:00+0805
申请号：	CN201911334796.3
公开号：	CN111103425A
代理机构：	南京正联知识产权代理有限公司
代理人：	陈斐
分类号：	G01N33/559;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/559
申请人地址：	210049 江苏省南京市栖霞区仙林大道18号
主权项：	1.一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：包括以下步骤， S1制备已知性别的银杏成年植株组织提取液； S2分别用步骤S1中得到的雌雄株的银杏成年植株组织提取液注射家兔进行免疫程序； S3检测步骤S2中免疫家兔的抗血清效价为1：64以上时，提取家兔血液，滤除其中的血红蛋白质，得到血清；然后将血清与相反性别的步骤S1中获得的雌雄株的银杏成年植株组织充分混合；再将混合溶液离心，滤除其中的沉淀，则分别获得雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清； S4利用步骤S3中获得雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清，在琼脂扩散凝集试验中鉴定得到待检测的银杏幼苗的性别。 2.根据权利要求1所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：步骤S1包括以下步骤， S11分别采集已知性别的成年银杏植株组织； S12在步骤S1中获得的成年银杏植株组织内加入pH值为8.3的Tir-HCl缓冲液和石英砂，然后进行研磨以获得组织提取液； S13将步骤S12中得到的组织提取液进行离心处理10min，离心机转速为2000rpm，然后取上清液，加入浓度为1%的凡士林继续研磨匀浆，制备成凝胶乳剂。 3.根据权利要求1所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：步骤S2中的家兔免疫程序为，选取两只家兔，分别向体内注射银杏成年植株组织提取液，每只兔子均注射8至10个点，每个点的注射量为0.1至0.2ml；等待4至7天后，再次注射以加强免疫一次。 4.根据权利要求3所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：家兔免疫程序可以进行两次以上的加强免疫注射，以提高抗体效价。 5.根据权利要求1所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：步骤S3包括以下步骤， S31在家兔免疫程序最后一次注射家兔的一周后，通过耳采方式采集家兔静脉血液3ml； S32将耳采得的家兔静脉血液置于5ml离心管内，在37度保温箱中静置9至12h， S33将静置后的家兔静脉进行离心处理10min，离心机转速2000rpm，滤除沉淀，分别获得雌雄株的家兔抗血清； S34将雄株的银杏组织提取液加入到雌株的家兔抗血清中，或者将雌株的银杏组织提取液加入雄株的家兔抗血清中，振荡充分后进行离心处理10min，离心机转速2000rpm，滤除沉淀，分别获得雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清。 6.根据权利要求1所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：步骤S3中，采用琼脂扩散凝集沉淀法检测所述雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清的效价。 7.根据权利要求7所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：使用琼脂扩散凝集沉淀法检测抗血清效价前，可以采用倍增法稀释抗血清。 8.根据权利要求1所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：重复步骤S1至S3，可以量产步骤S3中得到的雌雄株的特异性银杏性别鉴定抗血清。 9.根据权利要求8所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：量产时采用胸腔放血法采集兔血。 10.根据权利要求1所述一种鉴别银杏幼苗性别的血清学方法，其特征在于：所述方法可以用于鉴定银杏幼苗性别，也可以用于鉴定银杏成年植株性别。
所属类别：	发明专利